含HPV16型反义E7基因的重组腺相关病毒rAAV-HPV16E7AS的包装、纯化及鉴定  

Package,Purification and Identification of Recombinant Adeno-associated Virus rAAV-HPV16E7AS Containing Antisense E7 Gene of Human Papillomavirus 16

作　　者：邬素芳[1] 易诚青[1] 李静[2] 李辅军[2] 卢运萍[2] 马丁[2] 

机构地区：[1]上海交通大学附属第一人民医院,上海200080 [2]华中科技大学同济医院妇产科,武汉430030

出　　处：《中国生物制品学杂志》2007年第5期330-332,共3页Chinese Journal of Biologicals

基　　金：国家杰出青年基金(30025017)资助项目;国家重点基础研究发展规划项目(2002CB513100);国家自然科学基金面上项目(30271358);上海市卫生局面上项目(054019).

摘　　要：目的利用重组腺相关病毒载体系统,包装含HPV16型反义E7基因重组腺相关病毒rAAV-HPV16E7AS,并进行纯化及鉴定。方法利用磷酸钙沉淀法,将腺相关病毒载体系统共转染入病毒包装细胞293细胞中,分别合成rAAV-HPV16E7AS和rAAV-lacZ,用斑点杂交法测定重组病毒的滴度,并用重组病毒感染293细胞测定其转染效率。结果所构建的rAAV-HPV16E7AS和rAAV-lacZ滴度均为1.0×1010个病毒分子/ml,平均转染效率为75%。结论已成功构建rAAV-HPV16E7AS,为临床预防和治疗子宫颈癌提供新的手段。Objective To package, purify and identify the recombinant adeno-associated virus （rAAV） containing the antisense E7 gene of human papiilomavirus 16 （HPV16） by using rAAV vector system. Methods Co-transfect virus packaging ceils （293 ceils） with rAAV vector system by calcium phosphate precipitation to synthesize rAAV-HPV16E7AS and rAAV-IacZ respectively. Determine the titers of recombinant viruses by dot hybridization. Transfect 293 ceils with the recombinant viruses and determine the transfection efficiency. Results Both the titers of constructed rAAV-HPV16E7AS and rAAV-lacZ were 1.0 ×10^10 molecules/ml, and their mean transfection efficiency was 75%. Conclusion rAAV-HPV16E7AS was successfully constructed, which provided a novel route to prevention and treatment of cervical cancer.

关 键 词：人乳头瘤病毒 反义基因 腺相关病毒 

分 类 号：R737.33[医药卫生—肿瘤]