利用重组大肠杆菌合成几丁寡糖的研究  

Biosynthesis of Chitooligosaccharides by Recombinant Escherichia coli

作　　者：张大伟[1,2] 楚杰 郝永任 李明华 王鹏[3] 

机构地区：[1]山东省应用微生物技术重点实验室 [2]山东大学微生物技术国家重点实验室,济南250100 [3]山东大学微生物技术国家重点实验室

出　　处：《生物工程学报》2007年第3期525-529,共5页Chinese Journal of Biotechnology

摘　　要：提取根瘤菌Mesorhizobium.loti基因组,克隆编码N-乙酰氨基葡萄糖转移酶nodC基因,插入质粒pUC19的lac启动子的下游,构建并筛选出能够合成几丁寡糖的重组大肠杆菌DCL-3。利用优化的MMYNG培养基,重组大肠杆菌DCL-3在10L发酵罐中培养26h后,培养液菌体浓度测定OD560=10.8,几丁寡糖得率达到526mg/L。收集重组细菌的细胞并煮沸破碎,利用活性炭的吸附和P4凝胶层析对几丁寡糖产物进行分离纯化。纯化产物的液质分析(LC-ESI-MS)结果表明主要寡糖产物为几丁四糖(m/z,831[M+H]+)和几丁五糖(m/z,1034[M+H]+)。Acetyl-N-glucosaminyltransferase gene （nodC） was successfully cloned to Escherichia coli from Mesorhizobium loti. The recombinant E. coli harboring nodC gene was able to synthesize chitooligosaccharides （COs） in MMYNG medium. In optimized condition, a yield of 526 mg/L was obtained after 26 h cultivation in 10 L bioreactor. COs concentration reached up to 4.5% of the cell dry weight. The COs products were purified by charcoal adsorption and Bio-gel P4 chromatography, penta-N- acetylchitopentaose （m/z, 1034[M ＋ H]^＋ ）and tetra-N-acetylchitopentaose （m/z, 831 [M ＋ H]^＋ ） were identified as the dominating COs product using the method of liquid chromatography-electrospray ionization mass spectrometry （LC-ESI-MS）.

关 键 词：几丁寡糖 N-乙酰氨基葡萄糖转移酶 重组大肠杆菌 液质联用技术 

分 类 号：Q789[生物学—分子生物学]