幽门螺杆菌hpaA基因工程菌蛋白表达条件优化、纯化及其活性鉴定  

作　　者：黄学勇[1] 段广才[1] 范清堂[2] 郗园林[1] 黄志刚[2] 宋春花[1] 

机构地区：[1]郑州大学公共卫生学院流行病学教研室,郑州450052 [2]河南省分子医学重点学科开放实验室,郑州450052

出　　处：《广西医科大学学报》2007年第2期248-251,共4页Journal of Guangxi Medical University

基　　金：河南省医学创新人才基金资助项目(No.2000-84)

摘　　要：目的:优化幽门螺杆菌hpaA基因工程菌(pMAL-c2X-hpaA-TB1)的表达条件,并对其表达产物进行纯化和免疫活性鉴定。方法:通过诱导表达实验了解不同诱导时机、诱导剂浓度、诱导时间对蛋白表达量的影响,并应用SDS-PAGE方法对表达产物进行分析;Amyloss树脂预装柱对可溶性HpaA蛋白进行分离、纯化;对纯化后蛋白做Western blot实验鉴定免疫活性。结果:该工程菌培养2h时加入异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)终浓度为0.3mmol/L进行诱导4h,目的蛋白表达量达到菌体总蛋白的30%以上;经纯化得到了较高纯度(>90%)的目的蛋白,并具有良好的免疫活性。结论:建立了从TB1(pMAL-c2X-hpaA)可溶性表达产物中纯化高纯度rHpaA融合蛋白的方法,为进一步的动物实验和诊断性抗原的研制以及工程菌发酵、高效表达生产工艺的研究打下了基础。

关 键 词：幽门螺杆菌 基因工程 高效表达 纯化 免疫活性 

分 类 号：R378[医药卫生—病原生物学]