hBSP稳定转染乳腺癌细胞的筛选和鉴定  

作　　者：杜红延[1] 王捷[1] 郑霖[1] 杨静[1] 刘大志[1] 

机构地区：[1]广州军区广州总医院医学实验中心

出　　处：《广东医学》2007年第6期874-876,共3页Guangdong Medical Journal

基　　金：广东省自然科学基金资助项目(编号:04003534);广东省自然科学基金重点项目资助(编号:06104396)

摘　　要：目的筛选和鉴定人骨唾液蛋白(BSP)的荧光蛋白非融合表达载体和膜靶向表达载体稳定转染的乳腺癌细胞,为BSP在乳腺癌骨转移中作用的进一步体内、外研究奠定基础。方法经过4周400μg/mlG418的抗性筛选结合流式细胞仪荧光分选系统获得稳定转染乳腺癌细胞。采用RT-PCR、ELISA以及Western-blotting等方法检测和鉴定BSP在乳腺癌细胞中基因水平和蛋白水平的表达情况。结果筛选获得的乳腺癌细胞中BSP得到稳定表达,以β-肌动蛋白为内参,与空白对照相比BSP蛋白在基因水平上灰度比值从0.446分别增加为0.993和0.942;同时ELISA和Western-bolt实验结果证明BSP蛋白分泌表达和细胞内表达的量也均有所提高。结论稳定高表达BSP的乳腺癌细胞的获得为进一步BSP在乳腺癌骨转移中的作用的体内外试验研究奠定基础。

关 键 词：骨唾液蛋白 稳定转染 乳腺癌细胞 筛选 鉴定 

分 类 号：R737.9[医药卫生—肿瘤]