表达产物可用IMAC快速纯化的原核表达载体的组建与应用  

Construction and Application of A Prokaryotic Expression Vector which Expresses Protein Capable of Quickly Purified by IMAC

作　　者：李福胜[1] 贡惠宇[1] 李玉富[1] 张智清[1] 侯云德[1] 

机构地区：[1]中国预防医学科学院病毒学研究所病毒基因工程国家重点实验室

出　　处：《生物工程学报》1997年第1期42-46,共5页Chinese Journal of Biotechnology

基　　金：国家"863"高科技计划资助

摘　　要：以原核高效表达载体ｐＢＶ２２０为骨架载体，采用互补寡核苷酸插入法在ｐＢＶ２２０多克隆位点的上游插入了起始密码子和６组氨酸编码序列，将此新质粒命名为ｐＢＶ２２２，以此载体表达的目的蛋白在Ｎ段带有Ｈｉｓ６尾以利于ＩＭＡＣ层析快速纯化目的蛋白，酶切及核苷酸序列分析验证了我们的设计。将ＩＬ２和ＧＭＣＳＦｃＤＮＡ克隆入ｐＢＶ２２２载体中，表达的目的蛋白与预期的分子量相同，表达产物以包涵体的形式存在，表达量比非融合蛋白有明显的提高，且这种融合蛋白保留ＧＭＣＳＦ的生物学活性。表达菌体直接用６ｍｏｌ／Ｌ盐酸胍裂解或首先分离包涵体之后盐酸胍裂解，上清直接ＩＭＡＣ层析，以阶段性或线性ｐＨ梯度洗脱特异的目的蛋白。

关 键 词：基因表达载体 表达产物 固定化金属 亲和层析 

分 类 号：Q782[生物学—分子生物学]