实时定量RT-PCR技术测定初治白血病患者常见融合基因转录子水平及其标准化的探讨  

Detection of common fusion transcript levels in untreated leukemia patients by real-time quantitative RT-PCR technique

作　　者：秦亚溱[1] 李金兰[1] 主鸿鹄[1] 李玲娣[1] 常艳[1] 郝乐[1] 阮国瑞[1] 刘艳荣[1] 黄晓军[1] 陈珊珊[1] 

机构地区：[1]北京大学人民医院血液病研究所,100044

出　　处：《中华血液学杂志》2007年第7期433-437,共5页Chinese Journal of Hematology

摘　　要：目的了解白血病常见融合基因 M-bcr-abl(表达产物为 P210^(bcr-abl))、m-bcr-abl(表达产物为 P190^(bcr-abl))、TEL-AML1、AML1-ETO、PML-RARα、CBFβ-MYH11在初治白血病患者中的表达水平。方法采用基于 TaqMan 探针的实时定量 RT-PCR(RQ-PCR)技术检测195例白血病患者骨髓细胞融合基因转录子水平,其中 M-bcr-abl^+慢性粒细胞白血病慢性期(CML-CP)50例、M-bcr-abl^+急性淋巴细胞白血病(ALL)10例、m-bcr-abl^+ ALL 19例、TEL-AML1^+ ALL 11例、AML1-ETO^+急性髓系白血病(AML)30例、PML-RARα^+急性早幼粒细胞白血病(APL)58例、CBFβ-MYH11^+ AML 患者17例,并检测13例 M-bcr-abl^+ CML-CP 患者的外周血细胞融合基因转录子水平。以 abl 作为内参基因,融合基因转录子水平以融合基因转录子拷贝数/abl 基因转录子拷贝数×100%表示。结果 CML-CP 患者骨髓及外周血 M-bcr-abl 转录子水平相似(中位值分别为30%和35%,P>0.05)、ALL 患者 M-bcr-abl 及m-bcr-abl 转录子水平相似(中位值分别为64%和54%,P>0.05),ALL 患者 M-bcr-abl 转录子水平明显高于 CML-CP 患者(P<0.001)。ALL 患者 TEL-AML1转录子中位水平为228%。表达特异性融合基因的 AML 患者中,AML1-ETO 转录子水平明显高于 CBFβ-MYH11及 PML-RARα(中位值分别为388%,145%和47%,P 值均<0.001),CBFβ-MYH11转录子明显高于 PML-RARα(P<0.001)。L 型、V 型及 S 型 PML-RARα转录子中位水平分别为45%、44%及55%,L 型明显低于 S 型(P=0.04)。结论不同类型融合基因转录子在初治白血病患者中的水平不同,并有个体差异。初治患者融合基因转录子水平的测定不仅为检测微量残留病、评价疗效提供基准值,而且是不同实验室间数据比较、实现标准化的基础。Objective To evaluate levels of common specific fusion transcripts M-bcr-abl, m-bcr-abl,TEL-AML1, AML1-ETO, PML-RARα, CBFβ-MYHll in untreated leukemia patients. Methods Specific fusion transcript levels were detected by TaqMan-based real-time quantitative RT-PCR technique in a total of 208 samples, including 195 bone marrow samples from 50 M-bcr-abl（ ＋ ） chronic phase-chronic myeloid leukemia （CML-CP） , 10 M-bcr-abl（ ＋ ） acute lymphoblastic leukemia（ALL） , 19 m-bcr-abl（ ＋ ） ALL, 11 TEL-AML1（ ＋ ） ALL, 30 AML1-ETO（ ＋ ） acute myeloid leukemia（AML）, 58 PML-RARα（ ＋ ） acute promyeloeytic leukemia（APL） and 17 CBFβ-MYH11 （ ＋ ） AML patients and 13 peripheral blood samples from 13 M-ber-abl（ ＋ ） CML-CP patients, abl was chosen as internal control gene. Fusion transcript level was calculated as fusion transcript copies/abl transcript copies in percentage. Results Bone marrow and peripheral blood samples of CML-CP patients had similar M-bcr-abl fusion transcript levels （ median 30% vs 35%, P 〉 0.05 ）. M- and m-bcr-abl （ median 64% vs 54% ） levels were similar in ALL patients （ P 〉 0.05 ）, M-bcr-abl level was significantly higher in ALL than CML-CP patients（ P 〈 0. 001 ）. Median TEL-AML1 level was 228% in ALL patients. Among AML patients, AML1-ETO level was significantly higher than CBFβ- MYHll and PML-RARα levels （median 388% vs 145%, 388% vs 47%, all P 〈0.001 ）, CBFβ-MYH11 level was significantly higher than PML-RARα level（P 〈 0. 001 ）. Fusion transcript levels of L-, V- and S- type PML-RARα were 45% , 44% and 55% , respectively. L-type was significantly lower than S-type （ P =0.04）. Conclusions Fusion transcript levels in untreated leukemia patients were different and patient-to-patient variations did exist. Detection of fusion transcript levels in untreated leukemia patients not only provides baseline for minimal residual disease monitoring and treatment evaluation but also enable the comparison in inter-laborato

关 键 词：白血病 融合蛋白质类 逆转录聚合酶链反应 实时定量 

分 类 号：R733.7[医药卫生—肿瘤]