藏羚羊大脑皮质cDNA文库的构建  

作　　者：白振忠[1] 曹越[1] 杨应忠[1] 马兰[1] 靳国恩[1] 格日力[1] 

机构地区：[1]青海大学医学院高原医学研究中心,青海西宁810001

出　　处：《细胞与分子免疫学杂志》2007年第10期904-905,910,共3页Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30393133)

摘　　要：目的:构建藏羚羊大脑皮质组织的cDNA文库并鉴定文库质量。方法:提取藏羚羊大脑皮质组织总RNA,经oli-gotex试剂盒纯化得到mRNA。利用SMART技术,使用含有SfiIB酶切位点的oligo(dT)引物和含有SfiIA酶切位点的SMARTIV寡核苷酸在PowerScript逆转录酶作用下运用mRNA5′末端的模板转换方法合成cDNA第1链。利用LDPCR扩增cDNA,经SfiI(ⅠA和ⅠB)酶切后,通过CHROMASPIN-400柱进行分级分离去除<500bp的片段,再同经SfiI酶切的λTripIEx2载体连接,体外包装后转染到大肠杆菌XL1-Blue宿主菌中,进行文库滴度和重组率的测定,然后扩增文库并随机挑取10个噬菌斑行PCR反应鉴定插入片段大小。结果:构建的cDNA文库滴度为1.8×109pfu/L,重组率>98%,文库扩增后滴度达8×1012pfu/L,插入片段长度在750～6000bp之间,平均长度为4250bp。结论:文库具有良好的质量,为进一步筛选、克隆藏羚羊大脑皮质组织特异表达基因奠定了基础。

关 键 词：CDNA文库 藏羚羊 大脑皮质组织 SMART 

分 类 号：R392.11[医药卫生—免疫学]