SV40LTag基因诱导永生化大鼠肝星状细胞系的建立及鉴定  

Establishment of immortalized rat HSC induced by the genes of Simian Virus 40 large T antigen and study on the morphological and biological characteristics of the new HSC line

作　　者：庄鹏[1] 马会慧[2] 江元森[2] 陈伟[2] 杨林[2] 姚集鲁[2] 

机构地区：[1]深圳市第四人民医院感染科,广东深圳518033 [2]中山大学附属三院感染科,广东广州510630

出　　处：《中国病理生理杂志》2007年第10期2074-2077,共4页Chinese Journal of Pathophysiology

基　　金：国家自然科学基金资助项目(No.300243No.30571665);广东省自然科学基金资助项目(No.021857)

摘　　要：目的:建立长期传代、形态和生物学特性稳定的永生化HSC。方法:采用Pronase E、Ⅳ型胶原酶原位灌流消化及Nycodenz密度梯度离心分离大鼠原代肝星状细胞(HSC),并进行免疫组化SABC法鉴定和培养。用Effectene Transfection Reagent方法将携带SV40LTag基因的质粒PSV3neo(该质粒由意大利学者Giovanni Gaud-ino PhD惠赠)转染第1代HSC,以G418筛选直至获得阳性克隆细胞,经体外长期培养和传代后,以PCR方法检测其SV40LT抗原mRNA的表达,观察细胞形态学,绘制细胞生长曲线,MTT法检测细胞增殖能力,用免疫组化SABC法对α-SMA、SV40LTag、Ⅰ、Ⅲ型胶原(collagenⅠ、collagenⅢ)、desmin、转化生长因子-β1(TGF-β1)、血小板衍生的生长因子受体β型(PDGFRβ)进行免疫细胞化学检测,用β-actin做半定量RT-PCR检测I型胶原的表达,对其生物学特性进行研究。结果:本研究通过使用质粒PSV3neo转染正常大鼠HSC,经20 d抗性筛选,获得G418阳性克隆细胞,长期传代后细胞形态和结构保持完好,SV40LTag mRNA的表达检测和免疫组化染色结果阳性,经扩大筛选培养,该HSC细胞系目前已传了50代,保持着星形外观的HSC形态学特征,生长曲线显示转染阳性细胞倍增速度快,MTT法测定570 nm波长下A值显著高于对照组(P<0.01)。半定量RT-PCR法检测collagenⅠmRNA的表达明显高于对照组(P<0.01)。免疫组化染色显示能表达α-SMA、collagenⅠ、collagenⅢ、desmin、TGF-β1、PDGFRβ。结论:利用SV40LTag基因序列诱导建立了永生化大鼠HSC系,新建HSC系在体外可长期传代,倍增速度快,其形态和生物学特性与原代HSC形态相似。

关 键 词：肝星状细胞 细胞培养 永生化 

分 类 号：R363[医药卫生—病理学]