低浓度的哇巴因引起豚鼠心室肌细胞内钙增高的可能途径  

The probable pathway of low concentration of ouabain on intracellular calcium elevation in guinea ventricular mycytes

作　　者：熊晨[1] 武彦昭[2] 郭会采[1] 王永利[1] 

机构地区：[1]河北医科大学药理学教研室,河北石家庄050017 [2]河北医科大学附属四院五官科,河北石家庄050017

出　　处：《中国药理学通报》2007年第10期1363-1367,共5页Chinese Pharmacological Bulletin

基　　金：河北省自然科学基金资助项目(No301360)

摘　　要：目的观察哇巴因（ouabain，OUA）对豚鼠心室肌细胞内游离钙浓度（[Ca^2＋]i）的影响。方法酶解分离豚鼠心室肌细胞，负载Flu03-AM，激光共聚焦显微镜术测定单个心室肌细胞[Ca^2＋]。的荧光密度，结果用相对荧光强度（FI—FI0）／FI0（％）表示，其中，FI0：给药前的荧光密度值，FI：给药后的荧光密度值。结果在正常台氏液及无钙台氏液中，OUA（1×10^-9-1×10^-6mol·L^-1）浓度依赖性地升高细胞内钙浓度，在正常台氏液分别为16．7±6．8（P〈0.01）、26.0±4.7（P〈0.01）、183.0±101．0（P〈0.01）、295.0±172.0（P〈0.01），而在无钙台氏液中OUA升高[Ca^2＋]，不如在正常台氏液中，分别为9．19±4、73（P〈0.05）、20.75±5、2（P〈0.05）、85.79±64.7（P〈0.05）、231.0±26．0（P〈0.05）。肌浆网钙通道抑制剂理阿诺碱Ryanodine（1×10^-5mol·L^-1）可部分抑制正常台氏液时OUA的效应5、3±2、1（P〈0.01）。在无钠无钾台氏液中，OUA（1×10^-9-1×10^-6mol·L^-1）对心室肌细胞[Ca^2＋]．的影响分别为16.5±6.5、25.0±5.0、162．0±45．0.280．0±96.0与正常台氏液比较无差别（P〉0．05）。蛋白酪氨酸激酶抑制剂三羟异黄酮（genistein，GST；1、10、50、100μmol·L^-1）可浓度依赖性地抑制正常台氏液中的OUA效应，分别为17．5±3．1、14.2±8.9、0.8±7．6（P〈0.05）、-1．9±6．7（P〈0．01）。L-型钙通道激动剂Bay K8644，肌浆网钙通道开放剂Ryanodine（1×10^-7mol·L^-1）在正常台氏液中均可提高[Ca^2＋]；为13．3±3.2（P〈0．05）、6．4±5.6（P〈0．05）。三羟异黄酮可取消其效应为-13．0±21．0（P〈0．01）、-1.6±5．9（P〈0.01）。结论低浓度的OUA升高豚鼠心室肌细胞内游离钙浓度，此作用与其开放钙通道及促进内钙释放有关，且信号转导通过此二途径起作用。Aim To observe the effects of low concentration ouabain（OUA） on intracellular calcium concentration （ [ Ca^2 ＋ ] i） were investigated in guinea pig ventricular myocytes. Methods The guinea-pig ventricular myocytes were obtained by enzymatic dissociation technique, then were incubated with Fluo3-AM. The Fluo3-AM fluorescent signal was detected with confocal laser scanning microscopy. The change of [ Ca^2 i ]i was represented by the percentage of fluorescence intensity change [ （ FI-FI0 ）/FI0, % ] （ FI ： fluorescent intensity after addimg OUA, FI0 ： control）. Results In normal Tyrode, s solution and Ca^2＋-free Tyrode＇s solution.OUA （1 × 10^-9 - 1 × 10^-6 mol · L^-1） elevated [ Ca^2＋ ]i in a concentration-dependent manner, in normal Tyrode＇s solution by 16. 7 ±6. 8（P 〈0. 01 ） ,26. 0 ±4. 7（P 〈0. 01） ,183.0 ± 101.0（P 〈0.01） ,295.0 ± 172. 0（ P 〈 0. 01 ） respectively, however, the level of [ Ca^2＋]i elevation in Ca^2＋-free Tyrode＇s solution was lower than that in normal Tyrode＇s solution by 9. 19 ± 4. 73,20. 75 ±5.2,85.79 ±64. 7,231.0 ±26. 0（P 〈 0. 05 ）respectively. Ryanodine remarkably blocked the effects of OUA （10-s mol · L^-1） on [ Ca^2＋ ]ielevation in normal Tyrode＇s solution by 5.3 ±2. 1 （P 〈0. 01 ） , while completely blocked the elevation effects of OUA （10^-8 mol · L^-1） on [Ca^2＋ ]i in Ca^2＋-free Tyrode＇s solution. In Na^＋ ,K^＋-free Tyrode＇s solution OUA （1 × 10^-9 - 1 × 10^-6 mol · L^-1 ） elveled [ Ca^2＋ ]i by 16.5 ±6.5,25.0 ±5.0,162.0 ±45.0,280.0 ±96.0 respectively, to a similar as in normal Tyrode＇s solution （P 〉0. 05）. Genistein （GST） （ 1,10,50,100 μmol · L^- 1 ） abolished the OUA-induced increases in [ Ca^2 ＋ ] in a concentration-dependent manner by 17.5 ± 3.1, 14.2±8.9,0.8 ±7.6（P 〈0. 05）, -1.9 ±6. 7（P 〈0. 01 ）respectively. GST can also abolished the elevation effects of both ryanodine （ 10^-7 mol · L^-1 ） and BAY K8644 on [ Ca^2＋ ]i in

关 键 词：Na K—ATPase 心室肌细胞 激光共聚焦显微镜 细胞 内钙 

分 类 号：R-332[医药卫生] R322.11