多聚组氨酸标签的Attacin抗菌肽基因克隆及其在CHO细胞中稳定表达  

作　　者：徐建华[1] 朱家勇[2] 金小宝[2] 许琴英[3] 张秀明[1] 庄俊华[1] 马艳[2] 王艳[2] 

机构地区：[1]广东省中医院检验科,广州510120 [2]广东药学院基础医学院,广州510006 [3]广东医学院病原生物学教研室,广东湛江524023

出　　处：《广东医学》2007年第12期1910-1913,共4页Guangdong Medical Journal

基　　金：国家自然科学基金项目(编号:30671832);广东省科技计划社会发展攻关项目(编号:2003B31602);广州市科技计划攻关项目(编号:2005Z3-E0211)

摘　　要：目的克隆家蝇幼虫抗菌肽Attacin-His_6融合基因,构建真核表达载体并转染CHO细胞表达,为深入研究其生物学活性创造条件。方法以pUCm-T/Attacin载体为模板,用含6×His标签序列的下游引物克隆Attacin-His_6融合基因,并将其构建于pcDNA3.1(+)中,pcDNA3.1/Attacin-His_6重组质粒转染CHO细胞,ZeocinG418筛选阳性细胞株,RT-PCR检测重组质粒在CHO细胞的转录情况。结果成功扩增出Attacin-His_6融合基因,构建了pcDNA3.1/Attacin-His_6重组质粒并转染入CHO细胞中,RT-PCR从阳性克隆的CHO细胞中扩增出预期大小的目的片段,从转录水平证实CHO-Attacin-His_6重组细胞株表达了Attacin-His_6基因。结论抗菌肽Attacin基因哺乳动物型工程细胞表达系统的建立,为进一步制备其肽类抗生素奠定了基础。

关 键 词：抗菌肽 真核表达 中国仓鼠卵巢细胞 ATTACIN 

分 类 号：R971.1[医药卫生—药品]