CTLA4Ig基因重组腺病毒载体的构建及其体外表达  

作　　者：马会慧[1] 陆才生[2] 陈雪娟[1] 高志良[1] 李刚[1] 杨绍基[1] 姚集鲁[1] 

机构地区：[1]中山大学附属第三医院传染科,广东广州510630 [2]中山大学附属第三医院风湿科,广东广州510630

出　　处：《中山大学学报（医学科学版）》2005年第B03期157-159,共3页Journal of Sun Yat-Sen University:Medical Sciences

基　　金：国家自然科学基金(30240060);广东省自然科学基金(021857);广东省医学科学基金(B2000043)

摘　　要：【目的】构建表达人CTLA4Ig的非复制型重组腺病毒载体并检测其在真核细胞中的表达。【方法】分离人外周血单个核细胞，提取细胞总RIgA，经RT-PCR分别扩增含抑瘤素M信号肽的CTLA4胞外段及IgG恒定区（含绞链区-CH2-CH3）基因片段。将PCR产物克隆入pCDNA3，阳性重组子以双酶切和测序鉴定。将目的基因CTLA4-Ig亚克隆入腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV，与5型腺病毒骨架质粒pAdeasy-1共转染BJ5183，经细菌内同源重组构建重组腺病毒载体。采用脂质体法转染293细胞包装产生重组腺病毒，进一步感染HepG2细胞，采用RT-PCR及ELISA测定CTLA4Ig表达情况。【结果】构建了表达人CTLA4Ig基因的重组腺病毒，病毒滴度可达6×10^9pfu／mL，并能在HepG2和骨髓间充质干细胞中表达CTLA4Ig。【结论】成功构建表达CTLA4Ig的重组腺病毒载体，为进一步研究肝细胞移植排异及自身免疫性疾病的免疫调节治疗提供有力的手段与工具。

关 键 词：细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4免疫球蛋白 腺病毒 载体 基因表达 

分 类 号：R742.4[医药卫生—神经病学与精神病学]