腺病毒携带人内皮抑素基因在舌癌细胞和血管内皮细胞中的表达  

作　　者：陈宇[1] 丁学强[1] 李立[2] 黄嘉凌[2] 刘然义[2] 冼励坚[2] 赖坤 吴秀菊 柯妙拉 曾益新[2] 黄文林[2] 

机构地区：[1]中山大学附属第一医院口腔科,广东广州510080 [2]中山大学肿瘤防治中心,广东广州510060 [3]广州达博生物制品有限公司,广东广州510050

出　　处：《中山医科大学学报》2002年第B09期4-7,共4页Academic Journal of Sun Yat-sen University of Medical Sciences

基　　金：国家 8 6 3基金资助项目 ( 2 0 0 1AA2 170 81);广东省科技攻关基金资助项目 ( 2KM 0 440 4S)

摘　　要：【目的】以腺病毒携带的人内皮抑素基因 Endostatin基因 (Ad/hEnd)感染舌癌细胞株Tca8113和人脐静脉内皮细胞株ECV30 4,观察其在舌癌细胞和静脉内皮细胞株中的表达。【方法】用 2 93细胞扩增Ad/hEnd ,并抽提、纯化。以 10MOI的Ad/GFP感染ECV细胞 ,观察细胞中表达绿色荧光蛋白的细胞所占的比例。采用免疫组化法检测Endostatin蛋白在感染了Ad/hEnd的Tca细胞和ECV细胞中的表达。Ad/hEnd感染Tca细胞后收集细胞培养液上清 ,ELISA检测上清中Endostatin蛋白含量。Western blot检测Endostatin蛋白在Tca和ECV细胞中的表达。【结果】扩增的Ad/hEnd通过空斑形成试验准确测定其滴度可达 1× 1 0 1 0 ～ 8× 1 0 1 0 PFU/mL。表达绿色荧光蛋白的细胞所占的比例为 31 %。实验显示感染Ad/hEnd后 ,在Tca细胞和ECV细胞胞浆内有Endostatin蛋白合成。细胞培养液上清中Endostatin蛋白表达浓度呈时间剂量依赖关系 ,最高达到 5 97μg/L。Western blot检测显示Endostatin蛋白可在两种细胞中高效表达 ,相对分子质量与自然Endo statin蛋白一致 ,无杂合蛋白 ,呈剂量依赖关系 ,且持续到第 7天仍呈明显的Endostatin蛋白质条带。【结论】本实验制备的重组腺病毒Ad/hEnd能在舌癌细胞和血管内皮细胞中有效表达Endostatin蛋白 。

关 键 词：口腔肿瘤 癌 鳞状细胞 腺病毒 血管内皮抑素 基因治疗 

分 类 号：R73[医药卫生—肿瘤]