骨髓中一类新细胞群——神经组织定向干细胞的确立(英文)  

Identification of neural tissue-committed stem cells, a new cellular group, in bone marrow

作　　者：张志英[1] 任丛莉[1] 张传森[1] 李亮[1] 党瑞山[1] 孔征东[1] 

机构地区：[1]解放军第二军医大学解剖教研室,上海市200433

出　　处：《中国组织工程研究与临床康复》2008年第8期1577-1580,共4页Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research

摘　　要：背景：骨髓间充质干细胞和造血干细胞具有分化为神经类细胞的潜能己得到共识。另有研究者认为骨髓中除骨髓间充质干细胞和造血干细胞以外，还寄居着CXCR4阳性的组织定向干细胞，包括骨骼肌、心、肝及神经组织定向干细胞。目的：实验拟进一步证实神经组织定向干细胞寄居于骨髓，并寻求确立神经组织定向干细胞分离、培养的新方法。设计：开放性实验。单位：解放军第二军医大学解剖学教研室。材料：所用成年清洁级SD大鼠由解放军第二军医大学动物中心提供。DMEM/F12,B27，N2均购自Invitrogen公司；bFGF源于CytoLab Ltd;EGF源于Invitrogen公司；Nestin、CXCR4,β-Tublin Ⅲ，神经胶质纤维酸性蛋白等一抗为Santa Cruz公司兔抗鼠多克隆抗体；MAP2ab（Clonell—5B），CNPase（Clone AP20）为NeoMarkers公司小鼠抗大鼠单克隆抗体；荧光（FITC，Cy3）标记试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司；免疫组化试剂盒购自Vector Laboratories公司。NycoPrep^TM分离液（1．077A）购自Axis-Shield公司。方法：实验于2004-01／2006-12在解放军第二军医大学组织工程研究所完成。取SD大鼠双侧股骨及胫骨，冲洗骨髓腔，经NycoPrep^TM分离液分离单核细胞层，DMEM／F12（1：1）无血清神经干细胞培养液（内含2％B27，1％N2，20μg/L碱性成纤维细胞生长因子，20μg／L表皮生长因子，1×10^5U/L青霉素，100mg／L链霉素），通过先贴壁、后悬浮的方法从骨髓中分离、培养单克隆生长的神经组织定向干细胞。主要观察指标：通过免疫细胞化学法检测神经组织定向干细胞细胞球CXCR4和nesfin蛋白，以及细胞球自然分化后神经元以及神经胶质细胞的标志蛋白。结果：①神经组织定向干细胞细胞球表达神经干细胞标志蛋白nesfin和组织定向干细胞标志蛋白CXCR4。②神经组织定向干细胞细胞球在含15％胎牛血清的DMEM培养液�BACKGROUND： It has been widely accepted that both bone marrow-derived mesenchymal stem cells （MSCs） and hematopoietie stem cells （HSCs） have the capacity to differentiate into neural lineages. Some scholars believe that in addition to HSCs and MSCs, bone marrow （BM） also harbors a highly mobile population of CXCR4^＋ tissue committed stem cells （TCSCs）, including skeletal muscles, heart, liver, and neural tissue. OBJECTIVE： To make sure that neural tissue-committed stem cells （NTCSCs） reside in the bone marrow, and to establish a purification and culture method for bone marrow-derived NTCSCs. DESIGN： Opening animal study. SETTING： Department of Anatomy, the Second Military Medical University of Chinese PLA. MATERIALS： Adult Sprague-Dawley （SD） rats （pathogen-free） were provided by the Animal Center of the Second Military Medical University of Chinese PLA. Dulbecco＇s modified eagle＇s medium （DMEM）/F12, B27, N2 and epidermal growth factor （EGF, Invitrogen Company）, basic fibroblast growth factor （bFGF, CytoLab Ltd）, rabbit anti-rat Nestin,CXCR4, β -Tublin Ⅲ, glial fibrillary acidic protein （GFAP, Santa Cruz Company）, mouse anti-rat microtubule associated protein 2ab （MAP2ab） （Clonel 1-5B）, cyclic nucleotide 3＇phosphohydrolase （CNPase, Clone AP20, NeoMarkers Company）, fluorescent（fluorescein isothiocyanate, Cy3） marker reagents （Wuhan Boster Bioengineering Co., Ltd）, nuclear fluorescent dyes 4,6-diamidino-2-phenylindole（DAPI）（Sigma）, immunohistochemistry reagents （Vector Laboratories Company）, and NycoPrepTM separation liquid （1.077A, Axis-Shield Company） were used in this study. METHODS： This study was performed in the Department of Anatomy, the Second Military Medical University of Chinese PLA from January 2004 to December 2006. Bone marrow was harvested from bilateral femurs and tibias of 2-3 weeks SD rats. Mononuclear cell layer was isolated by NycoPrepTM separation liquid and suspended in DMEM/Fl2（l

关 键 词：骨髓 神经组织定向干细胞 细胞培养 鉴定 细胞移植 

分 类 号：R394.2[医药卫生—医学遗传学]