人肠癌RKO细胞周期依赖性激抑制因子基因启动子区甲基化状态的研究  

Methylation analysis of cycfin-dependent kinase inhibitor genes in human colorectal cancer cell

作　　者：方晓明[1] 姜朝晖[1] 彭佳萍[2] 孙立峰[2] 郑树[2] 

机构地区：[1]解放军第117医院普通外科,杭州310013 [2]浙江大学医学院肿瘤研究所

出　　处：《中华实验外科杂志》2008年第3期302-304,共3页Chinese Journal of Experimental Surgery

基　　金：国家重点基础研究发展规划项目（G1998051200）;浙江省科技计划资助项目（011110541）

摘　　要：目的探讨人结肠癌RKO细胞周期依赖性激酶抑制因子（CKIs）家族启动子区CpG岛甲基化状态及其甲基化可逆性特征。方法应用特异性DNA甲基转移酶（DNMTs）抑制剂5-Aza-2’-deoxycytidine（5-Aza-CdR）处理肠癌细胞，甲基特异性聚合酶链反应（Methylation—Specific PCR，MSP）、T—A克隆及DNA测序法分析RKO细胞CKIs家族抑癌基因p15^ink4b、p16^ink4a／CDKN2、p21／cip、p27／kip启动子CpG岛甲基化状态。结果未经5-Aza-CdR作用的肠癌RKO细胞，其p15^ink4b、p16^ink4a／CDKN2基因组DNA胞嘧啶（C）保持不变，这提示在其单链DNA中胞嘧啶呈甲基化状态；而经5-Aza—CdR作用的肠癌RKO细胞，其p15^ink4b、p16^ink4a／CDKN2、p21／cip和p27／kip基因组DNA胞嘧啶均已变为胸腺嘧啶，表明在DNA单链中胞嘧啶已呈去甲基化状态。结论肠癌RKO细胞周期INK4家族（p15^ink4b和p16^ink4a／CDKN2）基因的启动子区处于异常的高甲基化状态，而KIP／CIP家族（p21／cip和p27／kip）基因未处于高甲基化状态；5-Aza-CdR能较好地逆转肿瘤细胞INK4家族基因DNA高甲基化状态。Objective To detect the methylation status of cyclin-dependent kinase inhibitor genes （CKIs） promoter region and their demethylation specifity in human colorectal cancer RKO cells. Methods RKO cells were treated with selective DNA methyhransferase enzyme （DNMTs） inhibitor-5-Aza-2＇ -de- oxycytidine （5-Aza-CdR）. Methylation-specific PCR （MSP） ,T-A clone and DNA sequence analysis were used to detect 5＇CpG island methylation status of INK4 （p15^ink4b and p16^ink4a/CDKN2） and CIP/KIP （ p21/cip and p27/kip） promoter region respectively. Results All cytosines（C） of INK4 （ p15^ink4b and p16^ink4a/CDKN2） in the cells not treated with 5-Aza-CdR RKO were remained C ,which revealed all the cytosines in promoter region were methylated. However, all cytosines （C） of INK4 （p15^ink4b, p16^ink4a/ CDKN2）, CIP/KIP （p21/cip, p27/kip） in the cells treated with 5-Aza-CdR were converted to T, which revealed all the cytosines （C） in promoter region were unmethylated. Conclusion INK4 （p15^ink4b and p16^ink4a/CDKN2） promoter regions are in DNA abrreant hypermethylation in RKO cells and the CIP/KIP （p21/cip and p27/kip） promoter regions are not. The specific DNA 5-Aza-CdR may effectively cause demethylation of INK4 （p15^ink4b and p16^ink4a/CDKN2）.

关 键 词：结肠肿瘤 甲基化 启动子 

分 类 号：R735.3[医药卫生—肿瘤]