HIV-1 HXB2株Tat蛋白在大肠杆菌中的分段表达及免疫原性分析  

Segmentative expression of HIV-1 HXB2 subtype tat protein in E.coli and immunogenicity analysis of expressed peptides

作　　者：陈璐[1] 潘卫[2] 曹洁[2] 卢海妹[1] 何俊[1] 蒋少华[2] 唐萍[1] 李存枚[1] 廖文婷[2] 邓松华[1] 

机构地区：[1]安徽医科大学病理生理教研室,合肥230032 [2]第二军医大学微生物教研室,上海200433

出　　处：《安徽医科大学学报》2008年第3期239-243,共5页Acta Universitatis Medicinalis Anhui

基　　金：安徽省自然科学基金项目(编号:050430706);安徽省教育厅自然科学基金项目(编号:KJ2007B196)

摘　　要：目的研究对人类免疫缺陷病毒Ⅰ型HXB2株调控蛋白Tat原核表达产生影响的区域和Tat蛋白重要的抗原表位。方法用PCR方法获得Tat(1-48aa)、Tat(22-72aa)和Tat(38-101aa)DNA片段,构建其原核表达质粒pET32a-Tat(1-48aa)、pET32a-Tat(22-72aa)和pET32a-Tat(38-101aa),并转入E.coliBL21(DE3)中进行诱导表达及纯化,SDS-PAGE鉴定表达及纯化产物。采用间接ELISA方法用兔抗pET32a-Tat抗血清对三种肽段进行免疫原性分析。结果成功构建了pET32a-Tat(1-48aa)、pET32a-Tat(22-72aa)和pET32a-Tat(38-101aa)质粒,分别表达出相对分子质量(Mr)为23×103、23×103和25×103的融合肽段,其浓度分别为4.26、3.35和5.11mg/ml。间接ELISA结果表明三种融合肽段与兔抗pET32a-Tat抗血清均呈特异性结合反应,其抗体滴度分别为1:128000、1:32000、1:64000,而抗血清与pET32a蛋白仅有较弱结合。结论半胱氨酸富集区(22-37位氨基酸)对Tat蛋白的原核表达有较显著影响;Tat蛋白的N端区、碱性区和C端区是其重要的抗原表位,其中N端区的免疫原性最强。Objective To discover the region which affect the prokaryotic expression of HIV-1 HXB2 subtype Tat protein and its important epitopes. Methods Tat（1-48aa） ,Tat（22-72aa）and Tat（38-101aa）DNA fragments were obtained in vitro by PCR and cloned into pET32a vector. The pET32a- Tat（ 1-48aa）, pET32a-Tat（22-72aa） and pET32a-Tat（38-101aa） plasmids were established and transformed into E. coli BL21 （DE3） strains. Analyzing the expressed and purified products by SDS-PAGE. Results The recombinant plasmid pET32a-Tat（1-48aa） , pET32a- Tat（22-72aa） and pET32a-Tat（38-101aa） were established successfully and expressed the product of the relative molecular mass（MWw） were 23 000,23 000 and 25 000. The dense of the purified PET32a-Tat （ 1-48aa）, PET32a-Tat（22-72aa） and PET32a-Tat（38-101aa） were 4.26 mg/ml,3.35 mg/ml and 5.11 mg/ml. ELISA testify the anti -sera of PET32a-Tat protein from rabbtis could react specifically with PET32a-Tat（1-48aa） ,PET32a- Tat（22-72aa） and PET32a-Tat （38-101aa） ,and the titres were 1 ： 128 000, 1 ： 32 000,1 ： 64 000 respectively and its reaction with PET32a protein was weak. Conclusion Cysteine-rich region（22-37aa） can affect the expres- sion of Tat protein greatly, the N-region, basic region. C-region are the important epitopes of Tat and N-region is the most significant one of these.

关 键 词：HIV-1/遗传学 大肠杆菌/遗传学 基因产物 tat/遗传学 基因表达 

分 类 号：R373.51[医药卫生—病原生物学] R378.21[医药卫生—基础医学]