调控蛋白PrfA的单个氨基酸突变对单核细胞增生李斯特菌毒力基因转录水平的影响  

作　　者：罗勤[1] 周青春[1] 冯莹颖[1] 张晓莉[1] 

机构地区：[1]华中师范大学生命科学学院遗传调控与整合生物学湖北省重点实验室,武汉430079

出　　处：《自然科学进展》2008年第8期941-945,共5页

基　　金：国家自然科学基金(批准号: 30500025);教育部留学回国人员科研启动基金;教育部"二一一"重点学科项目资助

摘　　要：PrfA是单核细胞增生李斯特菌(L.monocytogenes)中迄今为止发现的唯一一个调控绝大多数毒力基因转录表达的蛋白因子.为了深入研究PrfA结构和功能的关系,模拟一株自然界分离得到的PrfA组成型突变株P14A(血清型4b),将标准野生株EGDe(血清型1/2a)的PrfA第145位甘氨酸突变为丝氨酸(简称PrfA*),分别构建野生型PrfA和突变型PrfA*表达融合载体,提取并纯化相应蛋白用于体外转录,直接检测依赖于PrfA的毒力基因plcA,hly和actA启动子的转录活性;同时,将携带prfA和prfA*的载体分别电转化入prfA基因缺失菌株中,应用实时RT-PCR检测plcA,hly和actA体内转录水平.实验结果显示:突变型PrfA*蛋白明显增强了plcA,hly和actA启动子的体外转录活性;依赖于PrfA的毒力基因在携带突变型PrfA*蛋白的菌株中的体内转录水平远远高于携带野生型PrfA蛋白的菌株,说明PrfA第145位甘氨酸突变为丝氨酸后增强了PrfA蛋白与其靶基因的结合能力,从而提高其表达水平.

关 键 词：单核细胞增生李斯特菌 PrfA蛋白 单个氨基酸突变 体外转录 

分 类 号：Q517[生物学—生物化学] TS201.3[轻工技术与工程—食品科学]