人FcγRⅡ真核表达质粒的构建及稳定转染细胞系的建立  

Construction of eukaryotic expression plasmid of human FcγRⅡand establishment of cell line stably transfected with the constructed plasmid

作　　者：席俊[1] 张改平[2] 张利娜[2] 张红[2] 乔松林[2] 苗现伟[2] 何礼洋[1] 张乃生[1] 

机构地区：[1]吉林大学畜牧兽医学院,长春130062 [2]河南省农业科学院

出　　处：《第二军医大学学报》2008年第9期1110-1113,共4页Academic Journal of Second Military Medical University

基　　金：国家自然科学基金(30730068);国家重点基础研究发展计划("973"计划;2005CB523200)~~

摘　　要：目的:建立稳定表达人FcγRⅡ(human Fc gamma receptor Ⅱ,huFcγRⅡ)的真核细胞系,为后续研究奠定基础。方法:采用RT-PCR方法从人外周血白细胞合成FcγRⅡcDNA,构建huFcγRⅡ表达质粒pcDNA3-huFcγRⅡ,经酶切和PCR鉴定后,将pcDNA3-huFcγRⅡ质粒通过脂质体转染法转染COS7细胞,并经G418筛选获得稳定表达huFcγRⅡ的细胞克隆。采用免疫荧光法和玫瑰花环试验检测huFcγRⅡ的表达。结果:构建的pcDNA3-huFcγRⅡ真核表达质粒经酶切鉴定与预期一致,稳定转入COS7细胞后,经免疫荧光染色,约90%的转染细胞可见荧光,而未转染的COS7对照细胞未见荧光。结论:成功构建pcDNA3-huFcγRⅡ真核表达质粒,建立了稳定表达huFcγRⅡ的细胞系,为进一步研究奠定了基础。

关 键 词：huFcγRⅡ受体 COS7细胞 免疫荧光检测 玫瑰花环试验 

分 类 号：Q785[生物学—分子生物学]