利用体细胞核移植技术生产表达增强绿色荧光蛋白(EGFP)的转人溶菌酶基因(HLY)的猪克隆胚胎  

作　　者：李秋艳[1,2] 卫恒习[1] 郭英[1] 李燕[2] 赵蕊[2] 于政权[1] 汤波[2] 张磊[2] 戴蕴平[1,2] 李宁[1] 

机构地区：[1]中国农业大学农业生物技术国家重点实验室生物学院,北京100094 [2]北京济普霖生物技术有限公司,北京100094

出　　处：《自然科学进展》2008年第10期1157-1162,共6页

基　　金：国家自然科学基金(批准号:5030001);国家"引进国际先进农业技术计划"(批准号:2006-G59)资助项目

摘　　要：由于生理特性和器官大小的原因,猪在人类疾病模型和器官移植方面具有很大的应用潜力.正因如此,猪基因结构的修饰对农业生产和人类医学两方面都意义重大.研究用脂质体介导的方法转染了猪胎儿成纤维细胞,所用结构为双标的人溶菌酶质粒(pBC1-HLY-GFP-NEO).分别对包含两个品种(五指山猪、长白猪)的5个细胞系(sw7,sw8,slw3,slw6和slw9)进行了转染.经过14d,1000μg/mL浓度G418药物的筛选处理,sw7,sw8,slw3和slw6等4个细胞系的95以上细胞都表达绿色荧光蛋白,而细胞系slw9的转染效率只有49.3.用转染效率高的3个细胞系作为核供体构建猪克隆胚胎,通过电刺激方法进行融合和激活,然后在PZM3中体外培养.48h后,重构胚的平均卵裂率为76.7;经过7d培养后观察,有18.5的胚胎发育到囊胚阶段,其中93.3的囊胚在荧光显微镜下能够发出绿色荧光,但囊胚之间的荧光强度存在差异.研究结果表明,通过脂质体介导的方法可以获得高转染效率的转基因猪胎儿成纤维细胞系,但细胞系之间的转染效率不同;用转基因猪胎儿成纤维细胞构建的重构胚,能够成功发育到囊胚阶段,而且大多数为表达绿色荧光蛋白的阳性胚胎.

关 键 词：EGFP 猪 核移植 胎儿成纤维细胞 人溶菌酶(HLY) 

分 类 号：Q813[生物学—生物工程] X172[环境科学与工程—环境科学]