SV40T抗原真核表达载体的构建及其在食管癌细胞EC9706中的表达鉴定  

作　　者：陈辉[1] 杜春艳[2] 谢庆瑞 马慧洁[1] 张钦宪[1] 

机构地区：[1]郑州大学基础医学院,河南郑州450052 [2]郑州大学实验动物中心 [3]漯河市第一人民医院

出　　处：《山东医药》2008年第26期39-41,共3页Shandong Medical Journal

基　　金：河南省重大科技攻关计划资助项目(0623031400)

摘　　要：构建胃壁细胞特异性表达载体pcDNA3.1(-)/HKSV和非特异性表达载体pcDNA3.1(-)/SV,行酶切及测序鉴定。用脂质体转染法将构建的载体导入食管癌细胞EC9706细胞株,RT-PCR法检测SV40T抗原基因的表达,免疫组化法检测蛋白表达情况。结果限制性内切酶分析与测序结果示H+/K+ATP酶β亚基启动子与SV40T基因成功构建于pcDNA3.1(-)真核表达载体中;转染细胞提取基因组DNA及总RNA,分别经PCR和RT-PCR反应扩增出618 bp和272 bp的特异性片段,非特异性表达载体pcDNA3.1(-)/SV瞬时转染时SV40T抗原表达阳性,而特异性表达载体pcDNA3.1(-)/HKSV转染组蛋白表达阴性。认为构建特异性表达载体pcDNA3.1(-)/HKSV并在食管癌细胞EC9706中检测其表达为转基因肿瘤动物模型的建立奠定了理论基础。

关 键 词：SV40T抗原 转染 真核载体 

分 类 号：R735.2[医药卫生—肿瘤]