基因重组hVEGF165腺相关病毒载体的包装和鉴定  

The Package and Differenciation of rAAV-hVEGF_(165) Vector

作　　者：李曦铭[1] 王林[2] 韩瑞发[2] 刘利维[2] 丛洪良[1] 

机构地区：[1]天津市胸科医院,300051 [2]天津医科大学第二医院

出　　处：《天津医药》2008年第10期786-788,I0003,共4页Tianjin Medical Journal

基　　金：天津自然科学基金资助项目(项目编号:05YFJMJC12500)

摘　　要：目的:采用rAAV Helper free System构建hVEGF165腺相关病毒和增强型绿色荧光蛋白腺相关病毒,并初步鉴定其感染情况。方法:采用AAV-Helper free system包装系,构建hVEGF165腺相关病毒和增强型绿色荧光蛋白腺相关病毒载体质粒,应用电穿孔方法质粒共转染HEK293细胞,分离纯化后获得rAAV-hVEGF165和rAAV-EGFP,AVSachTMELISA法测定rAAV颗粒滴度,并鉴定其对HEK293细胞的感染情况。结果:包装纯化后获得病毒滴度可达到2×1011,电镜观察病毒颗粒均匀,病毒大小20～25nm,呈多面体形态。结论:成功包装hVEGF165腺相关病毒和增强型绿色荧光蛋白腺相关病毒。Objective： Using rAAV Helper free System to packe rAAV-hVEGF165/EGFP. Methods： Collecting and purifying the rAAV-hVEGF165 and rAAV-EGFP after co-transfecting HEK293 cells with three plasmids constructed with rAAV Helper free System using gene engineering and molecular biology, and using AVSachTM ELISA to get the virus density. Finally, the infecting ability was tested. Results： Packaging the rAAV-hVEGF/EGFP with the viral particles （v.p.） of rAAV was 2×10^11, and its diameter was about 20-25 nm uniformly. Conclusion： rAAV-hVEGF/EGFP was successfully packaged.

关 键 词：血管内皮生长因子类 依赖病毒 DNA 重组 遗传载体 绿色荧光蛋白质类 

分 类 号：R394.8[医药卫生—医学遗传学] R394[医药卫生—基础医学]