牦牛IFN-γ基因的表达及其产物的生物学活性分析  

Expression of yak interferon-γ mature protein gene in Escherichia coli and bioactivity analysis of the expressed product

作　　者：王生富[1] 窦永喜[1] 陈国华[1] 贾怀杰[1] 房永祥[1] 景志忠[1] 

机构地区：[1]中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部公共卫生重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室,甘肃兰州730046

出　　处：《中国兽医科学》2008年第11期983-989,共7页Chinese Veterinary Science

基　　金：国家高技术研究发展计划(863)项目(2006AA10A203);甘肃省农业生物技术专项(GNSW07-11);兰州市科技项目(06-2-23)

摘　　要：用植物血凝素和脂多糖诱导牦牛外周血淋巴细胞,提取细胞总RNA,利用RT-PCR技术克隆了牦牛IFN-γ(YakIFN-γ)基因,然后设计了1对表达引物,从pGEM-YakIFN-γ载体上扩增YakIFN-γ成熟蛋白基因,将牦牛IFN-γ基因与表达载体pET-30a连接,构建了重组表达质粒pET-30-YakIFN-γ。用IPTG诱导表达的可溶性表达产物经镍柱亲和纯化,用纯化的重组YakIFN-γ蛋白进行了MTT、抑制肿瘤细胞增殖和细胞病变抑制的生物学特性研究。结果显示,成功克隆和表达了YakIFN-γ基因;序列分析表明:克隆的YakIFN-γ基因序列与GenBank上登录的黄牛IFN-γ基因序列的同源性为99.0%。SDS-PAGE分析和Western-blot检测证实,获得了高纯度的重组YakIFN-γ蛋白。重组YakIFN-γ(rYakIFN-γ)对伪狂犬病病毒的活性单位为2.2×103U/mg。表明表达并纯化的rYakIFN-γ蛋白具有较高的生物学活性和干扰病毒复制的活性。Total RNA was extracted from yak peripheral blood lymphocytes stimulated with phytohe- magglutinin（PHA） and lipopolysaccharide（LPS）. The Yak interferon-γ（YakIFN-γ） cDNAs were amplified by RT PCR. One pair of primers were designed to amplify the gene encoding YakIFN-γ, from pGEM-T- YakIFN-γ, and cloned it into pET-30a vector, named pET 30a YakIFN-γ. The expressed YakIFN-γ protein was purified by Ni agarose gel. The purified expressed product was analyzed by SDS-PAGE and Western- blot. The biological characteristics of YakIFN y（rYakIFN-γ） protein was examined by MTT,tumor cell proliferation test. Homology analysis showed that YaklFN-γ gene shared 99.0% with bovine IFN-γ gene available in GenBank^TM. The activity of rYakIFN-γ against pseudorabies virus（PRV） was about 2.2 × 10^3 U/mg.

关 键 词：牦牛 IFN-Γ 基因 表达 生物学活性 

分 类 号：S852.42[农业科学—基础兽医学]