王生富

作品数：9被引量：16H指数：3
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供职机构：中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室更多>>
发文主题：牦牛克隆基因克隆生物学活性CD8Α更多>>
发文领域：农业科学生物学更多>>
发文期刊：《动物医学进展》《中国兽医科学》《细胞与分子免疫学杂志》《中国兽医学报》更多>>
所获基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金国家科技支撑计划甘肃省农业生物技术专项更多>>
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猪CD8α分子胞外区基因片段的原核表达
《甘肃农业大学学报》2010年第6期18-22,共5页崔青 孙晓林 王生富 房永祥 陈国华 曾爽 景志忠 
国家自然基金项目(30871884);甘肃省农业生物技术专项(GNSW-2008-2);甘肃省科技支撑计划(0804NKCA076)
采用PCR技术从pGEM-pCD8α重组质粒中克隆了pCD8α胞外区去信号肽基因片段,并构建原核表达载体pET-30a-pCD8α-ED,在不同IPTG浓度和时间下进行诱导表达.结果表明:SDS-PAGE表达出约25ku的融合蛋白,目的蛋白主要以包涵体的形式存在,IPTG...
关键词：猪CD8α分子 胞外区基因片段 原核表达 
牦牛IFN-β基因在毕赤酵母中的分泌表达
《甘肃农业大学学报》2010年第5期6-10,共5页王生富 孙晓林 段风云 何延华 闫鸿斌 景志忠 
国家高新技术“863”项目(2006AA10A203);国家支撑计划项目(2006BAD31B03)
用真核表达引物从pGEM-yakIFN-β重组质粒中扩增出牦牛IFN-β基因,将目的基因和真核表达载体pPIC9K连接转入E.coli的JM109中,得到pPIC9K-yakIFN-β重组表达质粒.通过电击法将经SalⅠ线性化的pPIC9K-yakIFN-β质粒转化到巴斯德毕赤酵母GS...
关键词：牦牛 IFN-β基因 巴斯德毕赤酵母 分泌表达 
猪Toll样受体7基因的克隆及序列分析被引量：5
《细胞与分子免疫学杂志》2010年第6期599-601,共3页段凤云 房永祥 陈国华 王生富 何延华 景志忠 
国家自然科学基金资助项目(30871884);国家高新技术研究发展计划(863)资助项目(2006AA10A203)
目的:研究猪TLR7基因的分子结构与功能。方法:用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增技术,从猪脾脏淋巴细胞中克隆猪Toll样受体7基因(pTLR7),利用生物信息学技术预测其结构与功能。结果:基因序列分析表明,克隆的pTLR7基因为3153bp,编码1...
关键词：猪Toll样受体7 分子克隆 序列分析 结构预测 
猪CD8分子α链胞外区基因片段在毕赤酵母中的表达被引量：1
《中国兽医科学》2010年第5期465-469,共5页崔青 王生富 房永祥 陈国华 孙晓林 景志忠 
国家自然科学基金项目(30871884);甘肃省农业生物技术专项(GNSW-2008-2);甘肃省科技支撑计划项目(0804NKCA076)
为了给猪CD8α分子单克隆抗体的研制提供高生物学活性的抗原,采用PCR方法从pGEM-T-pCD8α重组质粒中克隆了pCD8α分子的胞外区基因片段,构建了真核融合表达载体pPIC9K-pCD8α-ED,在毕赤酵母中进行表达,并对重组基因工程菌的发酵时间、p...
关键词：猪CD8α分子 胞外区基因片段 真核表达 毕赤酵母 
猪Toll样受体9基因的克隆、序列分析及其结构预测被引量：2
《中国兽医学报》2009年第12期1640-1644,共5页段凤云 景志忠 房永祥 陈国华 乔军 王生富 何延华 
甘肃省重大科技专项基金资助项目(2GS063-A43-013);高科技发展计划基金资助项目(2006AA10A203)
本研究应用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增技术,从猪脾脏淋巴细胞中,克隆了猪Toll样受体9基因(pTLR9)。基因序列分析表明,克隆的pTLR9基因ORF为3 093 bp,编码1 030个氨基酸,含18.5%的亮氨酸,含有24个氨基酸的信号肽序列,属于Ⅰ型跨...
关键词：猪Toll样受体9基因 基因克隆 序列分析 生物信息学 
牦牛外周血单个核细胞抑制消减cDNA文库的构建及部分差异表达分子的克隆分析被引量：3
《中国预防兽医学报》2009年第8期631-636,共6页何延华 景志忠 陈国华 房永祥 蒙学莲 李小庆 段风云 王生富 
国家863项目(2006AA10A203);甘肃自然基金(325061-A25-081)
为筛选牦牛外周血单核细胞(PBMC)差异性基因,以刀豆素A(ConA)和脂多糖(LPS)联合刺激的PBMC cDNA为实验组,未经诱导刺激的PBMC cDNA为驱动组,利用抑制性消减杂交技术(SSH)构建了丝裂原诱导刺激PBMC的消减文库并对其部分阳性克隆进行了ES...
关键词：外周血单个核细胞(PBMC) 诱导刺激 抑制消减杂交 CDNA文库 
牦牛IFN-γ基因的表达及其产物的生物学活性分析被引量：2
《中国兽医科学》2008年第11期983-989,共7页王生富 窦永喜 陈国华 贾怀杰 房永祥 景志忠 
国家高技术研究发展计划(863)项目(2006AA10A203);甘肃省农业生物技术专项(GNSW07-11);兰州市科技项目(06-2-23)
用植物血凝素和脂多糖诱导牦牛外周血淋巴细胞,提取细胞总RNA,利用RT-PCR技术克隆了牦牛IFN-γ(YakIFN-γ)基因,然后设计了1对表达引物,从pGEM-YakIFN-γ载体上扩增YakIFN-γ成熟蛋白基因,将牦牛IFN-γ基因与表达载体pET-30a连接,构建...
关键词：牦牛 IFN-Γ 基因 表达 生物学活性 
猪CD8β基因的克隆、表达及其结构与功能分析被引量：5
《中国预防兽医学报》2008年第9期737-742,共6页王生富 景志忠 陈国华 房永祥 莫斯科 段凤云 何延华 
“863”项目(2006AA10A203);国家支撑计划项目(2006BAD31B03)
本研究应用RT-PCR技术,从猪胸腺细胞总RNA中扩增、克隆了猪CD8β基因,序列分析表明CD8β含621bp的开放阅读框,编码207个氨基酸,与NCBI/GeneBank已发表的参考基因的核苷酸及推导氨基酸序列的同源性分别为97.8%和96.8%,与人、小鼠和鸡CD8...
关键词：猪CD8 Β基因 克隆 表达 结构预测 
牦牛IL-4基因的克隆及其遗传演化关系分析被引量：2
《动物医学进展》2008年第8期24-28,共5页何延华 房永祥 陈国华 段风云 王生富 李小庆 景志忠 
国家高新技术"863"项目(2006AA10A203);甘肃省自然基金项目(3ZS061-A25-081)
克隆牦牛白细胞介素-4（IL～4）基因，并对其进行遗传演化分析。从刀豆素（ConA）和脂多糖（LPS）联合刺激培养的牦牛外周血淋巴细胞提取总RNA．利用RT—PCR方法扩增牦牛IL-4全长cDNA，将其克隆到pMD18～T载体上，测序后进行序列分析。...
关键词：白介素4 克隆 序列分析 牦牛 
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