细菌光敏色素PCB-AphA(26-320)体内重组与条件优化  

Optimization of the in vivo reconstitution of cyanobacterial phytochrome PCB-AphA(26-320)

作　　者：陈思礼[1,2] 苏平[3] 胡勋[1] 周明[4] 

机构地区：[1]华中科技大学环境科学与工程学院,武汉430074 [2]中南民族大学生命科学学院,武汉430074 [3]湖北师范学院生命科学学院,湖北黄石435002 [4]华中农业大学农业微生物国家重点实验室,武汉430070

出　　处：《华中师范大学学报（自然科学版）》2008年第4期606-611,共6页Journal of Central China Normal University：Natural Sciences

基　　金：国家自然科学基金项目(30670489);高校博士学科专项科研基金项目(20060487018);中南民族大学引进人才自然科学基金项目(YZZ04006).

摘　　要：为验证鱼腥藻PCC7120细菌光敏色素脱辅基蛋白AphA（26—320）与藻蓝胆素（PCB）异源体内重组的可行性，并获取光化学活性高、表达量大的细菌光敏色素，通过多个目的蛋白在单个大肠杆菌细胞体内共表达的方式，促使鱼腥藻PCC7120细菌光敏色素脱辅基蛋白AphA（26—320）与藻蓝胆素（PCB）的在异源细胞内进行自催化连接．吸收光谱所产生的可逆光致变色效应显示，AphA（26—320）与藻蓝胆素进行了正确的体内重组，AphA（26—320）脱辅基蛋白与藻蓝胆素在体内完成了自催化共价连接；在此过程中还发现：在生长浓度达到OD600=0．6时，冰浴30min，一次性加入终浓度为1mmol／L的IPTG，于30℃，摇床速度为100r／min的条件下诱导表达12～15h可取得较好的效果．The deletion mutated AphA （26-320） apophytochrome from Anabaena sp. PCC7120 was able to autoassembly with phycocyanobilin in vitro. Two genes involved in the biosynthesis of bilin from Anabaena sp. PCC7120 and AphA（26-320） apophytochrome from the same organism were co-expressed in Escherichia coli to produce holo- phytochrome. Through the absorption spectra, the results show that AphA（26-320） apophytochrome could bind covalently phycocyanobilin in an autocatalytic reaction. The expression in E. coli was optimized, the cotransformed strains were incubated at 37℃ until OD600 reached 0.6, and then induced with isopropyl-h-D-thiogalaetoside （1 mmol） and rotating speed （100 r,/min） at 30℃ for 12～15 hours.

关 键 词：细菌光敏色素 体内重组 自催化连接 表达条件 

分 类 号：Q946.1[生物学—植物学] X503.225[环境科学与工程—环境工程]