His-GILZ原核表达载体的构建及其表达与纯化  

作　　者：王毅飞[1] 蔡德鸿[1] 陈宏[1] 莫永炎[2] 伊娜[3] 邢飞跃[4] 

机构地区：[1]南方医科大学珠江医院内分泌科,广州510282 [2]南方医科大学病理生理学教研室,广州510515 [3]广东省广州市中医院内分泌科,510130 [4]暨南大学组织移植与免疫中心,广州510632

出　　处：《广东医学》2009年第2期191-193,共3页Guangdong Medical Journal

基　　金：国家自然科学基金资助项目(编号:30470829)

摘　　要：目的获取糖皮质激素诱导亮氨酸拉链蛋白(GILZ)的His融合蛋白,为下阶段深入研究GILZ的结构、功能及筛取与其相互作用的蛋白打下基础。方法利用基因工程技术,BamHⅠ/XhoⅠ酶切真核表达质粒HA-GILZ/PcDNA3获得GILZ cDNA,重组于能表达6个组氨酸残基的原核表达质粒pET-30a中。然后用该亚克隆重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达,用Ni2+-NTA柱纯化。结果亚克隆获得GILZ/pET-30a高效原核表达重组载体,诱导表达的融合蛋白占细菌总蛋白高达40%以上,纯化的蛋白分子量约为24kD。结论成功构建His-GILZ融合蛋白原核表达载体,并高效表达、纯化,为进一步研究其结构功能关系和临床应用奠定了基础。

关 键 词：糖皮质激素诱导亮氨酸拉链蛋白 融合蛋白 原核蛋白 构建 纯化 

分 类 号：R394[医药卫生—医学遗传学] R392.12[医药卫生—基础医学]