小反刍兽疫病毒H基因的原核表达与鉴定  

Prokaryotic expression of peste des petits ruminants virus H gene

作　　者：李伟[1] 李刚[1] 邱文英[1] 贾凤芹[1] 曾妮[1] 吴素丽[1] 

机构地区：[1]中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,北京100193

出　　处：《中国预防兽医学报》2009年第2期117-121,共5页Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine

基　　金："十一五"国家科技支撑计划(2006BAD06A13-4);"948"项目(2007-G57-C);FAO/IAEA项目(14515-0;R1)

摘　　要：根据GenBank中已发表的小反刍兽疫病毒(PPRV)Nigeria75/1株的H基因序列,设计上下游引物并添加BamHⅠ酶切位点,以含有小反刍兽疫病毒H基因的Topo-PPRVH质粒为模板进行PCR扩增,扩增产物克隆于pEASY-T载体中,用BamHⅠ单酶切后将目的片段连接到原核表达载体pET-32a(+)中,核酸序列分析证明,成功构建了PPRVH原核表达质粒pET-32a-H。将pET-32a-H重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)进行融合表达,经SDS-PAGE电泳,可见H蛋白获得了高效表达,融合蛋白的分子量约为87ku,表达产物以包涵体的形式存在,其表达量达到菌体总蛋白的38%,占包涵体蛋白的80%以上。Western blot鉴定表明,所表达的重组蛋白能被抗组氨酸单抗、抗PPRV标准阳性羊血清及抗PPRV疫苗的羊血清所识别,具有良好的免疫原性。The H glycoprotein gene of peste des petits ruminants virus （PPRV） Nigeria 75/1 strain was amplified by PCR and cloned into prokaryotic expression vector pET-32a （＋）. The pET-32a-H plasmid was transformed into BL21 （DE3） and protein expression was analyzed by SDS-PAGE. The result showed that the H protein was efficiently expressed as an 87 ku fusion protein, which made up 38 % of total bacteria protein and more than 80 % of the inclusion body. The recombinant H protein could be detected with anti-histidine monoclonal antibody or goat anti-PPRV serum by western blotting.

关 键 词：小反刍兽疫病毒 H基因 原核表达 

分 类 号：S852.659.5[农业科学—基础兽医学]