M-CSF核内稳定表达细胞系的构建和鉴定  

Construction of nuclear localization vector pCMV/M-CSF and establishment of its stably expressing cell line

作　　者：涂剑[1] 滕淑静[2] 张晓红[3] 赵雪琴[1] 唐圣松[1] 

机构地区：[1]南华大学药物药理研究所,湖南衡阳421001 [2]岳阳职业技术学院,湖南岳阳414000 [3]南华大学组织胚胎学教研室,湖南衡阳421001

出　　处：《中国病理生理杂志》2009年第3期622-624,共3页Chinese Journal of Pathophysiology

基　　金：国家自然科学基金资助项目(No.30270684);湖南省学科建设资助项目

摘　　要：目的:构建真核细胞pCMV/nuc/M-CSF载体,建立M-CSF核内稳定表达细胞系,为进一步研究M-CSF的核内作用奠定基础。方法:采用PCR扩增人M-CSF活性片段,将M-CSF片段插入真核表达载体pCMV/myc/nuc,强制性把M-CSF引入细胞核内,通过PCR、测序鉴定筛选阳性重组体pCMV/M-CSF,脂质体介导转染HeLa细胞,经G418筛选后,用RT-PCR、间接免疫荧光鉴定其在HeLa细胞中的表达及定位分布。结果:琼脂糖电泳结果显示插入片段为1400bp左右,与预期M-CSF分子大小相当;DNA测序分析表明插入质粒的M-CSF无读码框移位,并与来源序列一致。RT-PCR和间接免疫荧光检测表明,转染pCMV/M-CSF的HeLa细胞能稳定表达M-CSFmRNA与M-CSF蛋白,且表达的M-CSF定位于HeLa细胞的细胞核。结论:成功构建了真核细胞pCMV/nuc/M-CSF载体,建立了M-CSF核内稳定表达细胞系。

关 键 词：巨噬细胞集落刺激因子 pCMV/myc/nuc载体 HELA细胞 

分 类 号：R363[医药卫生—病理学]