随机突变对扩展青霉脂肪酶最适作用温度的改善  

作　　者：胡长浩[1] 邹有土[1] 刘燕雅[1] 冯蔚宗[1] 林琳[1] 

机构地区：[1]福建师范大学生命科学学院

出　　处：《饲料工业》2009年第6期30-32,共3页Feed Industry

基　　金：国家自然科学基金资助项目(No.30270033);福建省自然科学基金资助项目(C0410009);福建省科技创新平台建设计划项目(2006H0085)

摘　　要：利用error-prone PCR和staggered extension process(StEP)相结合的方法对扩展青霉脂肪酶(PEL)进行定向进化,构建含有随机突变基因的重组质粒pPIC3.5K-lip-mutantx,电转化引入毕赤酵母GS115中,进行异源表达。高通量筛选获得一株最适作用温度比野生型提高了5℃的突变株。15%的SDS-PAGE表明突变体分子量与野生型一致,约为28kDa。基因测序结果表明,突变体第270位丙氨酸变为苏氨酸,后者是氢键的供体,能形成具有稳定空间结构的氢键,使酶结构更加稳定,在高温下更适于与底物结合。

关 键 词：扩展青霉脂肪酶 随机突变 最适作用温度 

分 类 号：Q55[生物学—生物化学]