人MCPH1基因shRNA逆转录病毒载体的构建及鉴定  

Construction and identification of recombinant retroviral vector expressing shRNA targeting human MCPH1 gene

作　　者：袁成福[1] 程莉[1] 黄秀凝[1] 卜友泉[1] 刘革力[1] 宋方洲[1] 

机构地区：[1]重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心,重庆400016

出　　处：《第二军医大学学报》2009年第4期450-453,共4页Academic Journal of Second Military Medical University

基　　金：国家自然科学基金(30800410)~~

摘　　要：目的:建立逆转录病毒介导的MCPH1基因RNA干扰表达体系并观察其在宫颈癌细胞(HeLa)中对MCPH1表达的影响。方法:将人MCPH1基因RNA干扰双链DNA片段重组到逆转录病毒质粒pSilencer5.1-H1 Retro中,构建携带人MCPH1基因RNA干扰逆转录病毒载体pSi RNA-MCPH1,经PT67细胞包装后,产生的重组逆转录病毒感染宫颈癌细胞株HeLa细胞,并用嘌呤霉素筛选产生稳定的细胞克隆,用RT-PCR和Western印迹检测细胞中MCPH1 mRNA和蛋白表达的变化。结果:重组pSi RNA-MCPH1质粒经测序鉴定正确;重组逆转录病毒感染HeLa细胞后用嘌呤霉素筛选出稳定的细胞克隆;RT-PCR和Western印迹检测人MCPH1 mRNA和蛋白表达水平明显低于阴性对照组和未干扰组。结论:携带人MCPH1基因RNA干扰双链DNA片段的逆转录病毒感染HeLa细胞后能明显抑制MCPH1 mRNA和蛋白表达,为进一步研究MCPH1在宫颈癌中的作用奠定了基础。

关 键 词：MCPH1 RNA干扰 逆转录病毒载体 宫颈肿瘤 

分 类 号：R737.33[医药卫生—肿瘤]