小反刍兽疫病毒N基因在大肠杆菌中的表达及鉴定  

Expression and Identification of Peste des petits ruminants virus N Gene in Escherichia coli

作　　者：贾凤芹[1] 李刚[1] 李伟[1] 范晓娟[1] 张坤[1] 

机构地区：[1]中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,北京100193

出　　处：《农业生物技术学报》2009年第2期195-200,共6页Journal of Agricultural Biotechnology

基　　金："十一五"国家科技支持撑计划(No.2006BAD06A13-4);农业部"引进国际先进农业科学技术"项目(No.2007-G57-C)资助

摘　　要：参照GenBank中小反刍兽疫病毒((Peste des petits ruminants virus,PPRV)N基因序列(Nigeria/75/1)(1578bp)设计了1对添加EcoRⅠ和NotⅠ酶切位点的引物,对从奥地利引进的pCI-neo-PPRN质粒进行PCR扩增,克隆至pGM-T载体,并转化大肠杆菌(Escherichia coli)TOP10感受态细胞,获得重组质粒pGM-T-PPRN。将重组质粒经EcoRⅠ和NotⅠ双酶切的产物插入原核表达载体pET-32a(+),构建原核表达质粒pET-PPRN,将其转化进BL21(DE3)感受态细胞中后用IPTG诱导表达,收集菌液进行SDS-PAGE电泳和Western blot分析,结果表明,小反刍兽疫病毒N基因在BL21(DE3)成功表达。所表达融合蛋白的相对分子质量约为80kD,并能被组氨酸单抗、PPRV标准阳性羊血清及PPRV疫苗免疫羊血清所识别。A pair of primers added EcoR Ⅰ and Not Ⅰ sites was designed and synthesized based on the sequence of the nucleocapsid（N） protein gene of Peste des petits ruminants virus （PPRV） for amplifying the full-length N gene fragment of pCI-neo -PPRN plasmid from Austria. The fragment was cloned into pGM-T vector and transformed into Escherichia coli TOP10. Then the cloned fragment was subcloned into prokaryotic expression vector pET-32a （＋）, and the recombinant expression plasmid pET-PPRN was expressed in E.coli BL21 （DE3） with IPTG. The size of the recombinant N fusion protein was 80 kD. The recombinant PPRV N fusion protein could be detected with Histidine monoclonal antibody or goat anti-PPRV sera by Western blot.

关 键 词：小反刍兽疫病毒 N基因 原核表达 

分 类 号：S188[农业科学—农业基础科学]