多重PCR—DHPLC技术检测肠出血性大肠杆菌O157：H7基因型的方法学研究  

Detection of Escherichia coli O157：H7 by multiplex PCR-DHPLC

作　　者：徐君怡[1] 曹际娟[1] 郑秋月[1] 王秋艳[1] 刘淑艳[1] 蒋丹[1] 

机构地区：[1]辽宁出入境检验检疫局技术中心食品微生物与转基因检测国家重点实验室 ,大连116015

出　　处：《中华微生物学和免疫学杂志》2009年第4期366-369,共4页Chinese Journal of Microbiology and Immunology

基　　金：国家“十一五”科技支撑计划课题（2006BAK02A13）

摘　　要：目的开发肠出血性大肠杆菌O157：H7的多重PER-变性高效液相色谱（DHPLC）检测方法。方法以编码大肠杆菌O157抗原的咖E基因、编码毒力因子的类志贺毒素（SET）基因为目的基因，选择2对引物，建立并优化了大肠杆菌O157：H7的多重PCR-DHPLC检测体系。扩增产物分别为224bp和499bp。结果采用37株细菌验证了该多重PCR具有良好的特异性。PCR检测的灵敏度可达到4CFU／ml。结论实验证明，研究建立的多重PCR-DHPLC方法可特异、灵敏地实现对大肠杆菌O157：H7的检测。Objective To develop the PCR-denaturing high performance liquid chromatography （DHPLC） for detection of E. coli O157： H7. Methods The virulence genes of Shiga-like toxin （SLT） and rfbE were specifically amplified by 2 sets of primers. The target gene fragments of the PCR assay were 224 bp and 499 bp, respectively. Results Analysis of 37 strains demonstrated that this PCR system was specific. The detection limit of the PCR was 4 CFU/ml. Conclusion These results indicated that the multiplex PCRDHPLC assay can be used for specific and sensitive detection of E. coli O157： H7.

关 键 词：大肠杆菌O157:H7 多重PCR 变性高效液相色谱 

分 类 号：R450[医药卫生—治疗学]