凝乳酶β-转角突变体的构建、表达和性质分析  

作　　者：黎红晔[1] 张渝英[1] 董贻诚[1] 杨开宇[1] 

机构地区：[1]中国科学院微生物研究所

出　　处：《生物工程学报》1998年第1期39-45,共7页Chinese Journal of Biotechnology

摘　　要：为了阐明牛凝乳酶的第二个发夹结构中的Ⅵ型β转角的功能，利用基因突变技术，将该转角的氨基酸残基（Ｌｅｕ２０Ｇｌｙ２１Ｔｈｅ２２Ｐｒｏ２３Ｐｒｏ２４Ｇｌｎ２５）改为（Ｌｅｕ２０ＧｌｙＧｌｙＧｌｎ２５）、（Ｌｅｕ２０ＳｅｒＧｌｙＧｌｎ２５）或（Ｌｅｕ２０ＧｌｙＳｅｒＧｌｎ２５），得到３个突变牛凝乳酶原表达质粒ｐＭＣＧＧ，ｐＭＣＳＧ和ｐＭＣＧＳ。除ｐＭＣＧＳ不能在大肠杆菌中表达外，ｐＭＣＧＧ和ｐＭＣＳＧ均能以包含体的形式进行表达，且表达水平与野生型相当。像野生型凝乳酶原一样，ｐＭＣＧＧ和ｐＭＣＳＧ的表达产物经过变性复性，均能自活化为假凝乳酶，而且复性后的酶原突变体在ＤＥＡＥＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ６Ｂ上的柱行为与野生型相类似，但突变体假凝乳酶的凝乳及水解酪蛋白活性均明显低于野生型。说明突变对酶原的折叠影响较小，但对酶的催化效率影响较大。

关 键 词：牛 凝乳酶 β-转角 突变体 结构 功能 

分 类 号：Q556.3[生物学—生物化学] Q754