人Tum-5基因逆转录病毒载体及包装细胞株的构建  

作　　者：盖晓东[1] 罗宏[1] 历春[1] 冯凯[1] 

机构地区：[1]北华大学基础医学院,吉林吉林132013

出　　处：《中国老年学杂志》2009年第10期1194-1196,共3页Chinese Journal of Gerontology

基　　金：吉林省卫生厅重点实验室科研课题(2005106)

摘　　要：目的构建携带Tum-5基因的逆转录病毒载体并对其进行包装,获得稳定的产毒细胞系。方法采用RT-PCR法从胎肾组织中扩增Tum-5基因片断,并将其定向克隆到逆转录病毒载体pLXSN中进行PCR、双酶切和测序鉴定。利用电穿孔方法将获得的重组质粒转染PA317细胞,经G418筛选抗性克隆,收集病毒上清后感染NIH3T3细胞测定病毒滴度。结果PCR、酶切证实Tum-5基因克隆至逆转录病毒载体pLXSN,Tum-5基因测序结果和原始序列相同。重组逆转录病毒载体转染PA317包装细胞,RT-PCR证实转染后的PA317细胞上清液中存在携带人Tum-5基因的病毒RNA,病毒滴度为2.05×104cfu/m。l结论成功的构建了携带人Tum-5基因的逆转录病毒载体,获得了稳定的产毒细胞系。

关 键 词：Tum-5基因 PLXSN 基因治疗 抗血管生成 逆转录病毒载体 

分 类 号：R730[医药卫生—肿瘤]