人瘦素基因的克隆及原核表达  

作　　者：陈强[1] 田智泉[1] 倪黎纲[2] 任利伟[1] 吴晓伟[1] 杨海燕[1] 孙敏[1] 李碧春[1] 

机构地区：[1]扬州大学动物科学与技术学院,江苏扬州225009 [2]江苏畜牧兽医职业技术学院,江苏泰州225300

出　　处：《畜牧与兽医》2009年第7期49-51,共3页Animal Husbandry & Veterinary Medicine

基　　金：国家高新技术863项目(2007AA100504);国家自然科学基金资助项目(30671509)

摘　　要：为了获得大量的、可供试验研究和制作生物反应器的人瘦素蛋白,从人脂肪组织中提取总RNA,用RT-PCR法获得了编码人瘦素(leptin)167个氨基酸残基的cDNA序列,并克隆至载体pMD19-TSimple上进行序列分析。以克隆的人瘦素cDNA为模板,用特异引物扩增瘦素基因,经EcoRI和BamHI双酶切,定向插入高效原核细胞表达载体pGEX-6P-1中,构建重组质粒并转化大肠杆菌BL21(DE3),通过IPTG诱导表达,进行SDS-PAGE检测。结果:用RT-PCR法扩增得到的cDNA片断序列分析显示,克隆的基因序列和GenBank公布的人瘦素基因序列一致;SDS-PAGE分析基因表达产物,在20 ku处有一特异条带,说明重组质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中可表达人瘦素蛋白。

关 键 词：瘦素 克隆 瘦素基因 原核表达 

分 类 号：Q78[生物学—分子生物学]