杨海燕

作品数：10被引量：26H指数：3
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供职机构：扬州大学动物科学与技术学院更多>>
发文主题：原核表达胚盘细胞X鸡胚胎干细胞电转染更多>>
发文领域：农业科学生物学化学工程医药卫生更多>>
发文期刊：《畜牧兽医学报》《黑龙江畜牧兽医》《中国畜牧杂志》《中国家禽》更多>>
所获基金：国家自然科学基金江苏省高校自然科学研究项目国家教育部博士点基金江苏省自然科学基金更多>>
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鸡胚胎干细胞的分离及其嵌合体制备条件探索被引量：2
《中国畜牧杂志》2012年第21期28-31,共4页张亚妮 杨海燕 施青青 张振韬 郑蒙蒙 王丹 李碧春 
高等学校博士学科点专项科研基金资助课题(20103250110006);江苏省"六大人才高峰";中国博士后基金(2012M11806)
分离培养鸡胚胎干细胞(ESCs),体外培养传代后,进行碱性磷酸酶活性检测和SSEA-1染色鉴定;并用线性化的质粒pEGFP-N1转染鸡ESCs。受体种蛋经赤道面开窗后,将经转染的ESCs注射到受体鸡胚胚下腔,以便制作嵌合体鸡;对获得的嵌合体鸡分别提取...
关键词：鸡胚胎干细胞 分离培养 显微注射 嵌合体鸡 
鸡X期胚盘细胞电转染外源基因条件的探索被引量：4
《中国畜牧杂志》2010年第23期15-20,共6页杨海燕 孙敏 田智泉 任丽伟 秦玉蓉 许峰 李碧春 
国家自然科学基金(30671509;30871791);江苏省高校自然科学重大基础研究项目(08KJA230001);国家高新技术"863"项目(2007AA100504)
以EGFP为报告基因体外电穿孔转染鸡X期胚盘细胞,探讨适宜电转染条件以及影响鸡ES细胞存活率和转染率因素。分离鸡X期胚盘细胞进行培养、传代及鉴定,二代细胞设定不同的电压、脉冲时间、质粒浓度、细胞密度及孵育温度等条件转染。电击后1...
关键词：胚胎干(ES)细胞 电穿孔 PEGFP-N1 鸡 
鸡Mx-EGFP融合表达蛋白的细胞亚定位及其抗病毒活性研究被引量：1
《畜牧兽医学报》2010年第12期1642-1648,共7页田智泉 倪黎纲 吴晓伟 任丽伟 杨海燕 孙敏 丁爱军 李碧春 
国家自然科学基金(30671509;30871791);江苏省高校自然科学重大基础研究项目(08KJA230001);江苏省自然科学基金(BK2007077)资助
为探索鸡Mx基因在细胞中表达的位置,以及Mx-EGFP融合表达时的抗病活性。构建了真核表达载体pcDNA3.0/EGFP-Mx,转染NIH-3T3细胞,通过报告基因EGFP的表达来定位Mx基因在细胞中表达的位置;通过抗VSV病毒试验来研究Mx-EGFP融合蛋白的抗病毒...
关键词：鸡 MX基因 表达 VSV 
鸡Ⅹ期胚盘细胞分散培养与整胚培养比较初探被引量：11
《中国家禽》2010年第7期14-17,共4页杨海燕 孙敏 田智泉 秦玉蓉 任丽伟 许峰 李碧春 
国家自然科学基金(30871791);江苏省高校自然科学重大基础研究项目(08KJA230001);国家高新技术863项目(2007AA100504);“六大人才高峰”项目资助
为比较鸡Ⅹ期胚盘细胞分散培养与整胚培养效果,对鸡Ⅹ期胚盘细胞分别进行分散培养和整胚培养并进行传代,观察细胞生长情况,通过碱性磷酸酶(AKP)染色鉴定计算阳性克隆率;结果,分散培养的细胞生长状态良好,整胚培养的细胞贴壁能力较差,培...
关键词：鸡X期胚盘细胞 分散培养 整胚培养 
鸡抗病毒Mx蛋白基因在毕赤酵母GS115中的表达
《黑龙江畜牧兽医》2010年第4期19-22,共4页田智泉 杨海燕 徐琪 孙敏 许峰 任丽伟 丁爱军 秦玉蓉 李碧春 
国家自然科学基金项目(30671509;30871791);高等学校博士学科点专项科研基金项目(20061117004);江苏省自然科学基金项目(BK2007077);江苏省高校自然科学重大基础研究项目(08KJA230001)
为了利用酵母表达技术制备鸡抗病毒Mx蛋白,试验采用基因工程技术,将编码鸡抗病毒Mx蛋白基因亚克隆至含有分泌信号肽序列的毕赤酵母表达载体中,构建成分泌型重组表达载体pPIC9K-Mx;用电转化法将线性化的pPIC9K-Mx转化至毕赤酵母菌株GS115...
关键词：毕赤酵母 MX蛋白 表达 
禽流感病毒NA基因稀有密码子分析及其原核表达被引量：2
《中国家禽》2009年第21期18-21,共4页任丽伟 丁爱军 杨海燕 田智泉 孙敏 徐贵江 李碧春 
国家自然科学基金(30671509和30871791);高等学校博士学科点专项科研基金资助项目(20061117004);江苏省自然科学基金(BK2007077);江苏省高校自然科学重大基础研究项目(08KJA230001)
通过原核表达获取禽流感病毒(AIV)NA蛋白,为深入研究该蛋白的抗病性奠定基础。本试验以pMD19-T-NA为模板,PCR扩增NA基因完整开放阅读框(ORF),然后克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,构建表达质粒pET-NA;转化E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达,...
关键词：基因 大肠杆菌 原核表达 稀有密码子 
鸡胚精原干细胞转染EGFP获得转基因精子的研究被引量：1
《细胞与分子免疫学杂志》2009年第10期938-941,共4页陈昊 孙敏 高元丰 余飞 孙国波 田智泉 杨海燕 任丽伟 李碧春 
国家自然科学基金资助项目(30671509;30871791);江苏省自然科学基金(BK2007077);高等学校博士学科点专项科研基金(20061117004)
目的:通过精原干细胞体外转染外源基因获得转基因精子。方法:孵化16d的鸡胚睾丸,酶消化获取精原干细胞(SSCs),纯化后体外培养和传代扩增,碱性磷酸酶(AKP)活性和胚胎阶段特异性抗原(SSEA-1)免疫荧光鉴定。电穿孔介导EGFP转染SSCs,G418筛...
关键词：鸡 胚胎精原干细胞 电转染 精子发生 
鸡Mx基因原核表达载体的构建及其表达分析
《中国家禽》2009年第17期14-17,共4页田智泉 孙敏 杨海燕 任丽伟 徐贵江 丁爱军 李碧春 
国家自然科学基金(30671509和30871791);高等学校博士学科点专项科研基金资助项目(20061117004);江苏省自然科学基金(BK2007077);江苏省高校自然科学重大基础研究项目资助(08KJA230001)
旨在大肠杆菌中表达鸡抗病毒Mx蛋白,为进一步研究该基因抗病活性奠定基础。本研究通过设计一对特异性引物,从已构建好的鸡Mx基因真核表达载体pcDNA3.0-MMx上扩增出Mx基因开放式阅读框(2118bp),并将其编码区重组于原核表达载体PGEX-6P-1...
关键词：MX基因 克隆 原核表达 蛋白 
人瘦素基因的克隆及原核表达
《畜牧与兽医》2009年第7期49-51,共3页陈强 田智泉 倪黎纲 任利伟 吴晓伟 杨海燕 孙敏 李碧春 
国家高新技术863项目(2007AA100504);国家自然科学基金资助项目(30671509)
为了获得大量的、可供试验研究和制作生物反应器的人瘦素蛋白,从人脂肪组织中提取总RNA,用RT-PCR法获得了编码人瘦素(leptin)167个氨基酸残基的cDNA序列,并克隆至载体pMD19-TSimple上进行序列分析。以克隆的人瘦素cDNA为模板,用特异引...
关键词：瘦素 克隆 瘦素基因 原核表达 
鸡胚胎干细胞分离培养和单细胞克隆的制备被引量：7
《中国家禽》2008年第22期30-34,共5页吴信生 何先红 戴建明 田智泉 杨海燕 徐琪 李碧春 
国家自然科学基金(30671509);国家高新技术"863"项目(2007AA100504)
从鸡第X期胚胎中分离胚盘,以鸡成纤维细胞为饲养层,用添加了10%的胎牛血清、2%的鸡血清、2mmol/LL-谷氨酰胺、1mmol/L丙酮酸钠、5.5×10-5mmol/Lβ-巯基乙醇、10μL/mL非必需氨基酸、以及含1000U/mLLIF、10ng/mLbFGF和5ng/mLSCF的高糖D...
关键词：鸡 胚胎干细胞 分离 培养 单细胞克隆 
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