鸡胚精原干细胞转染EGFP获得转基因精子的研究  

作　　者：陈昊[1] 孙敏[2] 高元丰[1] 余飞[2] 孙国波[2] 田智泉[2] 杨海燕[2] 任丽伟[2] 李碧春[2] 

机构地区：[1]苏州大学医学部,江苏苏州215006 [2]扬州大学动物科学与技术学院,江苏扬州225009

出　　处：《细胞与分子免疫学杂志》2009年第10期938-941,共4页Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30671509;30871791);江苏省自然科学基金(BK2007077);高等学校博士学科点专项科研基金(20061117004)

摘　　要：目的:通过精原干细胞体外转染外源基因获得转基因精子。方法:孵化16d的鸡胚睾丸,酶消化获取精原干细胞(SSCs),纯化后体外培养和传代扩增,碱性磷酸酶(AKP)活性和胚胎阶段特异性抗原(SSEA-1)免疫荧光鉴定。电穿孔介导EGFP转染SSCs,G418筛选8d后将阳性SSCs移植入经白消安处理的实验鸡体内。结果:移植后25d采集实验鸡精液检测,精子密度为3.87(1010/L),表达EGFP的成熟精子比率为4.25%;移植后85d,精子密度为3.27(1011/L),表达EGFP的成熟精子比率为16.25%。睾丸组织冰冻切片显示,曲精细管中转染后的SSCs定居在曲精细管的基底部,有表达EGFP蛋白生精细胞。收集实验鸡精液,提取DNA进行PCR扩增EGFP基因,经凝胶电泳检测,精液DNA的条带清晰,与目的片段大小一致。结论:鸡胚精原干细胞体外转染EGFP可获得转基因精子,为进一步生产转基因模型动物拓宽了途径。

关 键 词：鸡 胚胎精原干细胞 电转染 精子发生 

分 类 号：R51[医药卫生—内科学] R698.2[医药卫生—临床医学]