重组人生长激素体外干预人肝癌细胞生长及受体表达  

Effects of recombinant human growth hormone on proliferation and expression of growth hormone receptor of human fiver cancer cell in vitro

作　　者：陆颖芝[1] 李苏宜[2] 林岩[3] 杨芳[4] 谈华阳[2] 何向明[2] 

机构地区：[1]连云港市第二人民医院肿瘤科,222000 [2]东南大学附属中大医院肿瘤中心,南京 [3]南京医科大学第二附属医院肿瘤科 [4]东南大学生物医学与工程学院江苏省生物材料与器件重点实验室,南京

出　　处：《中华临床营养杂志》2009年第4期224-230,共7页Chinese Journal of Clinical Nutrition

基　　金：基金项目：南京市医学科技发展项目计划（YKK07097）

摘　　要：目的研究体外环境下重组人生长激素（rhGH）对生长激素受体（GHR）不同表达状态的人肝癌细胞株增殖、凋亡及其细胞膜表面GHR密度的影响。方法体外培养人肝癌细胞株HepG-2、SMMC7721和QGY-7701，采用免疫细胞化学方法检测这3种肝癌细胞GHR的表达。每种肝癌细胞根据不同处理分为4组：未处理组、50ng／mlrhGH干预组、100ng／mlrhGH干预组、200ng／mlrhGH干预组。采用四甲基偶氮唑蓝比色法、羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂（CFSE）荧光染色法、酶联免疫吸附法分析不同浓度rhGH对人肝癌细胞系的细胞生长、增殖、胰岛素样生长因子-1（IGF-1）分泌等的影响。流式、放射性受体分析方法检测rhGH处理后细胞膜表面GHR表达情况。结果细胞株HepG-2高表达GHR；与未处理组相比，50、100、200ng／mlrhGH干预24h后生长率明显增高为：107．705％、114．181％、107．406％（P〈0．05），48h后生长率明显增高为：109．594％、114．156％、109．292％（P〈0．05）；CFSE荧光强度明显减弱（P〈0．05）；50、100、200ng／mlrhGH干预组24h后下游蛋白IGF-1分别为（236．94±19．07）、（247．16±14．56）、（217．94±33．61）pg／ml，明显高于未处理组的（173．86±27．46）pg/ml（P〈0．05）；50、100、200ng／mlrhGH干预后，流式细胞术检测胞膜表面GHR表达情况，荧光强度较未处理组明显增加（P〈0．05）；放射性受体分析法检测50、100、200ng／mlrhGH干预后胞膜表面GHR位点数（10^3／细胞）分别为：8．44±0．24、9．40±0．51、8．33±0．31，明显多于空白对照组的7．51±0．54（P〈0．05）。细胞株SMMC7721弱表达GHR，细胞株QGY-7701未表达GHR，与未处理组比，rhGH干预组生长率、CFSE荧光强度、下游蛋白IGF-1、GHR表达差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论体外环境下，rhGH可以促进GHR高表达人肝癌细胞株HepG-2增殖，提高其IGF-1的�Objective To investigate the effects of recombinant human growth hormone （rhGH） on human liver cancer cells expressing different growth hormone receptor （GHR） in vitro. Methods The expressions of GHR on human liver cancer cell lines HepG-2, SMMC7721, and QGY-7701 were detected by immunohistochemical method. Each cell line was assigned to four groups according to the treatment manner： untreated group, 50 ng/ml rhGH treated group, 100 ng/ml rhGH treated group, and 200 ng/ml rhGH treated group. By methods of methyl thiazol tetrazulium （ MTT） assay, 5 （ 6 ） -（N-Succinimidyloxycarbonyl） -3＇, 6＇-0, O＇-diacetylfluorescein （CFSE） staining, and enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA） , effects of different concentrations of rhGH on the cell growth, proliferation rate, and excretion of insulin-like growth factor-1 （ IGF-1 ） of human liver cancer cell lines were analyzed. The expression of GHR in human liver cancer cell lines pretreated by rhGH was detected by fluorescence and radioligand assays. Results GHR was highly expressed in HepG-2 cells. Compared with the untreated group, the 24-hour growth rates in 50, 100, and 200 ng/ml rhGH treated group significantly increased by 107. 705%, 114. 181%, and 107. 406% （P 〈 0. 05）, and the 48-hour growth rates significantly increased by 109. 594%, 114. 156%, and 109. 292% （ P 〈 0.05 ）. The fluorescence intensities of CFSE significantly decreased （P 〈0.05）. The concentrations of IGF-1 in the four groups were （ 173.86 ±27.46） pg/ml, （236. 94 ± 19.07） pg/ml, （247.16±14. 56） pg/ml, and （217.94 ±33.61 ） pg/ml, respecetively; compared with the untreated group, it significantly increased in groups pretreated with different concentrations of rhGH （P 〈 O. 05 ）. By fluorescence, the expressions of GHR significantly increased in the treated groups （P 〈 0. 05 ）. By radioligand assays, the GHR site of the untreated group was （7.51±0. 54）× 10^3/cell, with the sites of 50, 100, and 200 ng/ml rhGH trea

关 键 词：重组人生长激素 生长激素受体 胰岛素样生长因子-1 肝癌 

分 类 号：R735[医药卫生—肿瘤]