5种人兽共患病病毒多重RT-PCR检测方法的初步建立  

Establishment of multiplex RT-PCR for the detection of five zoonosis viruses

作　　者：孙庆歌[1] 杨银辉[2] 张维军[1] 王群[1] 康晓平[2] 李永强[2] 白宇[1] 童铁钢[1] 杨涛[1] 步志高[1] 吴东来[1] 

机构地区：[1]中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室,黑龙江哈尔滨150001 [2]军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物/生物安全国家重点实验室,北京100071

出　　处：《中国预防兽医学报》2009年第10期785-789,共5页Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine

基　　金：国家863项目(2007AA02Z406)

摘　　要：为建立可同时检测裂谷热病毒(RVFV)、戊型肝炎病毒(HEV)、狂犬病毒(RV)、水泡性口炎病毒(VSV)及口蹄疫病毒(FMDV)5种人兽共患病病毒的多重RT-PCR快速检测方法,本研究根据GenBank登录的上述5种病毒的全基因组序列,设计了5对多重PCR引物,通过优化反应条件,建立检测以上5种病毒的多重RT-PCR方法。通过对同一种属的其他病毒及相关病毒的检测,确定方法的特异性;通过对体外转录合成的RNA进行定量检测的方法,确定方法的敏感度。实验结果表明:在同一RT-PCR反应体系中可同时检测以上5种病毒,扩增片段长度分别为499bp、137bp、274bp、224bp、389bp;而对新城疫病毒(NDV)、赤羽病病毒(AKAV)、牛流行热病毒(BEFV)和乙型脑炎病毒(JBEV)的检测均为阴性;5种病毒RNA的最低检测拷贝数分别为2.91×104、3.14×103、1.25×103、6.65×103和2.38×104。利用该方法对11份RV已知阳性样本和7份HEV已知阳性样本检测结果均呈阳性。本研究建立了一种快速、可同时检测5种人兽共患病病毒的多重RT-PCR检测方法,该方法具有良好的特异性和较高的敏感性。To develop a multiplex RT-PCR method for simultaneous detection of RVFV, HEV, RV, VSV and FMDV, a set of specific primers were designed based on the published sequences. PCR products of 499 bp, 137 bp, 274 bp, 224 bp and 389 bp were obtained for the respective viruses. The specificity of this method was evaluated by testing representative viruses in the same family and related zoonosis viruses and no PCR products were detected for NDV, AKAV, BEFV and JBEV. This method has a sensitivity of detecting as low as 2.91 ×10^4 （RVFV）, 3.14×10^3 （HEV）, 1.25 ×10^3 （RV）, 6.65 ×10^3 （VSV） and 2.38 ×10^4 （FMDV） copies of template RNA. Test on 11 RV samples and 7 HEV samples all produced positive results.

关 键 词：裂谷热病毒 戊型肝炎病毒 狂犬病毒 水泡性口炎病毒 口蹄疫病毒 多重RT-PCR 

分 类 号：S854.44[农业科学—临床兽医学]