去除蛋白激酶A磷酸化位点的线粒体融合素2基因对血管平滑肌细胞凋亡的影响(英文)  

Effects of Mitofusin 2 Gene with Protein Kinase A Phosphorylation Site Deletion on the Apoptosis of Vascular Smooth Muscle Cells

作　　者：周炜[1] 曹文静[2] 陈莉莉[3] 郭小梅[1] 陈光慧 

机构地区：[1]华中科技大学同济医学院附属同济医院心内科,湖北武汉430030 [2]华中科技大学同济医学院附属同济医院检验科,湖北武汉430030 [3]华中科技大学同济医学院附属同济医院老年科,湖北武汉430030 [4]美国国家卫生研究所心血管研究室

出　　处：《中华高血压杂志》2009年第11期995-999,共5页Chinese Journal of Hypertension

基　　金：supported by National Natural Science Foundation of China (No.30672206;No.30600233)

摘　　要：目的研究大鼠线粒体融合素2基因在去除蛋白激酶A磷酸化位点后对大鼠血管平滑肌细胞凋亡的影响及其相关的信号通路。方法构建携带去除蛋白激酶A磷酸化位点的线粒体融合素2基因重组腺病毒和携带线粒体融合素2基因的重组腺病毒并感染血管平滑肌细胞。Western blot分析两种基因表达产物;激光共聚焦显微镜观察其亚细胞定位;细胞凋亡ELISA法比较其对细胞凋亡的影响;Western blot分析磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)表达变化。结果外源基因转染后可表达特异性蛋白产物,都主要分布于线粒体外膜;细胞凋亡ELISA表明,去除蛋白激酶A磷酸化位点的线粒体融合素2基因诱导血管平滑肌细胞凋亡的作用显著减弱(P<0.01),与对照组无显著差异;Western blot检测表明,血管平滑肌细胞感染去除蛋白激酶A磷酸化位点的线粒体融合素2基因后,p-Akt表达较感染线粒体融合素2基因组显著升高(P<0.01),与对照组无显著差异。结论去除蛋白激酶A磷酸化位点后,线粒体融合素2基因表达产物亚细胞定位未发生改变,主要分布于线粒体外膜,但诱导血管平滑肌细胞凋亡的作用丧失,对蛋白激酶B信号通路也无抑制作用。表明蛋白激酶A磷酸化位点是调控线粒体融合素2基因诱导血管平滑肌细胞凋亡的重要功能位点。Objective To investigate the effects of mitofusin 2 （Mfn2） after deletion of the protein kinase A （PKA） phosphorylation site [Mfn2-PKA（A）] on promoting the apoptosis of vascular smooth muscle cells （VSMCs） and related signal pathway. Methods VSMCs were infected with adenovirus vector encoding Mfn2-PKA（A） or Mfn2 [Adv-Mfn2-PKA（A）, Adv-Mfn2]. The abundance of Mfn2-PKA（ A） protein and Mfn2 protein were determined by Western blot analysis using. Mfn2 antibody. Laser confocd microscopy （LCMS） was used to observe the location of proteins. The effects of Adv-Mfn2-PKA（A） on the apoptosis of VSMCs were explored by ELISA. Western blot were used to detect the expression of phosphorylation of protein kinase B （p-Akt）. Results Both Mfn2-PKA（A） and Mfn2 were located at the out membrane of mitochondria. Mfn2-PKA（Δ） had no effects on promoting the apoptosis of VSMCs compared with Mfn2 （P〈0.01）. Overexpression of Mfn2-PKA（Δ） gene could not down regulate the expression of p-Akt （P〈0.01）. Conclusion After deletion of the protein kinase A （PKA） phosphorylation site, mitofusin 2 （Mfn2） lost the effect on the apoptosis of VSMCs and p-Akt down regulation. PKA phosphorylation site appears to play an important role in regulating the function of Mfn2 gene.

关 键 词：线粒体融合素基因2 血管平滑肌细胞 凋亡 

分 类 号：R363[医药卫生—病理学]