人肿瘤坏死因子受体I死亡域融合蛋白基因的克隆与表达  

Cloning and Expression of a Fused Gene Encoding TNFRI Death Domain and Chloramphenicol Acetyltransferase

作　　者：林丽珠[1] 李昌本[1] 赵寿元[1] DeWilde G.Haegeman G.FiersW. 

机构地区：[1]复旦大学遗传学研究所遗传工程国家重点实验室 [2]比利时根特大学分子生物学实验室

出　　处：《生物化学与生物物理学报》1998年第6期597-600,共4页

基　　金：中比校际交流计划

摘　　要：通过设计４个引物进行重叠（ｏｖｅｒｌａｐｐｉｎｇ）ＰＣＲ，由此克隆了人肿瘤坏死因子受体Ｉ死亡域（ｄｅａｔｈｄｏｍａｉｎ）与氯霉素乙酰转移酶（ＣＡＴ）的融合蛋白基因（ＤｄＬｃａｔ）。该融合蛋白基因经测序，证明与设计的序列相同。构建成的重组表达质粒ｐＬＴ１０ＤｄＬｃａｔ转化大肠杆菌后发酵，ＩＰＴＧ诱导２ｈ，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定ＤｄＬｃａｔ蛋白质的分子量为３９ｋＤ。Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹实验进一步作了鉴定。表达产物大部分为包涵体。ＤｄＬｃａｔ经Ｑ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ柱层析后纯度大于９５％。By designing four primers for an overlapping PCR, we created a fusion gene Ddl cat encoding human TNF receptor I death domain and chloramphenicol acetyltransferase(CAT). By DNA sequencing, the whole sequence of the fusion gene is confirmed to be correct. Two hours after induction with IPTG, we could see an 39 kD extra protein band on SDS PAGE pattern. We proved that this 39 kD protein band is DdLcat protein by Western blotting. Then we purified this protein to the purity of 95% through Q Sepharose chromatography.

关 键 词：人肿瘤坏死因子 受体I 死亡域 融合基因表达 

分 类 号：Q78[生物学—分子生物学] R730.2[医药卫生—肿瘤]