转化生长因子β1活化肝星状细胞反式激活新基因剪切体的功能  

Function of TTG1A in hepatic stellate cells

作　　者：肖琳[1] 成军[1] 张黎颖[1] 郭江[1] 洪源[1] 张丽娟[1] 伦永志[1] 蓝贤勇[1] 武会娟[1] 张跃新[2] 张建龙[3] 李燕[4] 

机构地区：[1]北京地坛医院传染病研究所,100015 [2]新疆医科大学第一附属医院感染科 [3]新疆医科大学基础医学院 [4]中国医学科学院/北京协和医学院药物研究所

出　　处：《中华肝脏病杂志》2009年第12期925-929,共5页Chinese Journal of Hepatology

基　　金：国家重点基础研究发展计划“973”项目（2004CB518908）

摘　　要：目的探讨反式激活新基因剪切体TTG1A的生物学功能和参与肝纤维化的致病机制。方法应用酵母双杂交系统3，将PCR扩增的TTG1A基因与酵母表达载体pGBKT7连接，转化酵母细胞AH109，并在其内表达，而后与转化了人白细胞文库的质粒pACT2的单倍体酵母细胞Y187进行配合，在涂有X—α—gal营养缺陷型培养基上进行双重筛选，提取阳性酵母克隆的质粒转化大肠杆菌经BglⅡ酶切后测序，进行生物信息学分析。结果成功构建了重组酵母表达载体pGBKT7-TTG1A。应用酵母双杂交系统3从人白细胞文库中筛选出19个与TTG1A相互作用的蛋白，其中包括人类主要组织相容性复合物Ⅱ型DPD（HLA—DPB）、人类核糖体蛋白L30、人类核磷蛋白B23、人类核组蛋白2、人类ash2、人类变异的家族性脾性贫血和变异的异染性脑白质营养不良相关蛋白、人类死亡因子4（MORF4L1）、人类遍在蛋白偶连酶E2L3、人类载脂蛋白A-1（APOA1）、人类半乳凝素1以及5个未知功能蛋白。结论成功构建了重组酵母表达载体pGBKT7-TTG1A，初步揭示了新基因TTG1A的生物学功能，为进一步研究TGFβ1介导的肝纤维化分子发病机制中的作用提供基础。Objective To investigate the biological functions of TFG1A in liver fibrosis. Methods Yeast two-hybrid system was used to screen proteins associated with TFG1A. Briefly, the coding sequence of TTG1A was cloned into pGBKT7 vector, and the recombinant plasmid was transformed into yeast cells AH109 （ a type）, then these cells were mated with yeast cells Y187 （ α type） transformed with human leukocyte cDNA library plasmid pACT2. The obtained diploid yeast cells were plated on synthetic dropout nutrient medium containing X- α -gal for double selection. The plasmids from positive colonies were transformed into E.coli and sequenced. Results The recombinant yeast expression vector pGBKTT-TTG1A was successfully constructed. Nineteen TTG1A binding proteins, including homo sapiens major histocompatibilitycomplex, class Ⅱ DP beta 1 （HLA-DP β 1 ）, homo sapiens ribosomal protein L30 （RPL30）, homo sapiens nucleophosmin homo sapiens nucleobindin 2 （NUCB2）, homo sapiens ash2, variant Gaucher disease and variant metachromatic leukodystrophy, MORF4L1, homo sapiens uhiquitin-conjugating enzyme E2L3 （UBE2L3）, APOA1, homo sapiens lectin, and galectin 1, were idedtified. Conclusions This study may help to elucidate the molecular function of TTG1A.

关 键 词：转化生长因子Β 肝星状细胞 肝硬化 基因 TTG1A 

分 类 号：R575.2[医药卫生—消化系统] R512.63[医药卫生—内科学]