转染Podoplanin对口腔白斑细胞增殖和细胞周期的影响  

Effects of Podoplanin on cell proliferation and cell cycle in oral leukoplakia cells

作　　者：孙强[1] 严明[2] 周晓健[2] 李新明[1] 毛力[2] 陈万涛[2] 

机构地区：[1]郑州大学第一附属医院口腔颌面外科,450052 [2]上海交通大学医学院附属第九人民医院口腔医学院口腔颌面外科上海市口腔医学研究所上海市口腔医学研究重点实验室

出　　处：《中华口腔医学杂志》2010年第1期6-10,共5页Chinese Journal of Stomatology

基　　金：上海市重点学科建设规划（S30206）;上海市科学技术委员会科研计划（08JC1414400）

摘　　要：目的探讨转染外源性Podoplanin基因对口腔白斑细胞增殖和细胞周期的影响，以证实Podoplanin在白斑癌变中的作用。方法以口腔黏膜白斑细胞系Leuk—1、转染pCMV-Podoplanin表达质粒白斑细胞系A4—1和转染空白载体pCMV的白斑细胞系B4—1为细胞模型，应用荧光实时定量聚合酶链反应（PCR）检测转染目的基因后细胞中PodoplaninmRNA水平的变化。激光共聚焦显微镜和蛋白质印迹法观察转染目的基因后细胞中Podoplanin蛋白的定位和表达水平。甲基噻唑基四唑（MTT）法检测转染目的基因细胞增殖活性的变化。流式细胞仪检测过表达外源性Podoplanin后细胞周期分布的变化情况。结果转染外源性Podoplanin基因的A4—1细胞，mRNA相对表达量为0．022，明显高于B4—1细胞的0．001及Leuk-1细胞的0．002（P〈0．05）；A4—1细胞Podoplanin蛋白表达水平较B4—1和Leuk-1细胞明显提高。免疫荧光结果表明，3种细胞的胞质及胞膜均可见Podoplanin蛋白的表达，A4-1细胞的蛋白表达量（绿色荧光强度）明显高于B4-1和Leuk-1细胞。细胞生长曲线分析结果表明，A4-1细胞生长速度明显高于Leuk-1细胞，A4—1接种后3d增殖活性比Leuk-1细胞高40．4％（P〈0．05）。细胞周期检测结果显示，A4—1细胞处于G2～M期比例为（24．89±4．55）％，明显高于B4-1[（4．13±5．24）％]和Leuk-1细胞[（4．69±7．42）％]，P〈0．05；A4—1细胞增殖指数（0．57±0．06）高于B4-1（0．41±0．04）及Leuk-1（0．40±0．02），P〈0．05。结论口腔白斑细胞过表达外源性Podoplanin蛋白后，细胞生长和增殖能力明显增强；Podoplanin可能是口腔白斑细胞癌变的关键基因之一。Objective To investigate the effects of Podoplanin on cell proliferation and cell cycle in oral leukoplakia cells. Methods Oral leukoplakia cell line （Leuk-1） transfected with pCMV-Podoplanin （ A4-1 ） or pCMV （ B4-1 ） was used in this study. The levels of mRNA and protein of Podoplanin were detected by real-time PCR and Western boltting in A4-1, B4-1 and Leuk-1 cells. The localization of Podoplanin was detected by confocal microscope. Cell growth and proliferation was examined by methyl thiazolyl tetrazolium （MTT） assay and cell cycle was detected by flow cytometry（FCM）. Results The value of Podoplanin mRNA lever in A4-1 cells was 0. 022, which was significantly higher than the values in B4-1 （0. 001 ） and Leuk-1 cells （ 0. 002 ）, P 〈 0. 05. The gray scale of Podoplanin protein in A4-1 cells was significantly higher than in the control groups（P 〈0. 05）. The expression of Podoplanin was observed in cell plasm and membrane of A4-1 ,B4-1 and Leuk-1 cells. But the expression level of Podoplanin in A4-1 cells was higher than in control groups. A4-1 cells grew faster than Leuk-1 cells. The proliferation rate after 3 days of culture in A4-1 cells was 40. 4% higher than that in B4-1 cells（P 〈0. 05）. The G2-M phase（24. 89 ± 4.55）% and PI（0.57 ±0.06） of A4-1 cells were significantly higher than that in B4-1 cells[ （4. 13 ± 5.24） %, （0. 41 ± 0.04 ） ] and Leuk-1 cells [ （4. 69 ± 7.42） %, （ 0.40± 0.02 ） ], P 〈 0. 05. Conclusions Over expression of Podoplanin accelerated the growth and proliferation of oral leukoplakia ceils. Podoplanin may he one of key genes in the malignant transformation of oral leukoplakia.

关 键 词：白斑 口腔 细胞增殖 细胞周期 PODOPLANIN 

分 类 号：R739.8[医药卫生—肿瘤]