血小板衍生生长因子-BB通过转化生长因子-β信号系统调节大鼠血管平滑肌细胞内p21^WAF1表达  

Platelet-derived growth factor-BB inhibited p21^WAF1 expression partially through transforming growth factor-β signalling system in vascular smooth muscle cell

作　　者：潘大彬[1] 柯永胜[1] 刘文洁[1] 蔚有权[1] 唐军[1] 曹蘅[1] 

机构地区：[1]皖南医学院弋矶山医院心血管内科 皖南医学院心血管疾病研究所,芜湖241001

出　　处：《中华心血管病杂志》2010年第2期160-165,共6页Chinese Journal of Cardiology

摘　　要：目的探讨血小板衍生生长因子（PDGF）-BB是否通过诱导转化生长因子（TGF）-β1表达及其信号系统调节p21^WAF1表达。方法采取8～9周龄雄性Sprague-Dawley大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）进行体外培养，分为对照组、中和性抗TGF-β1抗体组（20μg/ml，抗体组）、PDCF—BB组（40ng／ml）、PDGF-BB＋中和性抗TGF-β1抗体组（PDGF-BB＋抗体组），实验时间为48h。逆转录酶-聚合酶链式反应检测TGF-β1 mRNA的表达，ELISA方法检测TGF-β1蛋白的表达。Western blot检测p21^WAF1及TGF-β1信号系统下游蛋白表达，后者包括TGF-β1 Ⅰ类受体（在VSMC内表现为ALK-5）、Smurf2、pSmad2／3、Smad4、Smad7。结果PDGF—BB组的TGF-β1 mRNA（24h）和TGF-β1（48h）蛋白分子表达水平分别为（447．716±23．911）和（0．309±0．034）ng／ml，明显高于对照组（250．435±17．869）和（0．104±0．013）ng／ml（P均〈0．01）。p21^WAF1蛋白表达在对照组0．621±0．046和抗体组0．657±0．058之间差异无统计学意义，PDGF—BB组表达仅为0．204±0．033，与对照组和抗体组比较差异均有统计学意义（P均〈0．01），PDGF—BB＋抗体组表达为0．530±0．043，与对照组和抗体组相比差异均有统计学意义（P均〈0．05），与PDGF—BB组比较差异亦有统计学意义（P〈0．01）。PDGF—BB组ALK-50．634±0．060、pSmad2／3 1．894±0．184、Smad41．129±0．136及Smurf20．559±0．047的表达水平分别高于对照组和抗体组0．288±0．049和0．300±0．047、0．972±0．096和0．887±0．059、0．665±0．055和0．709±0．058、0．158±0．040和0．224±0．064（P均〈0．01），对照组与抗体组之间差异无统计学意义，以上蛋白PDGF—BB＋抗体组的表达分别比PDGF—BB组低了（85±9．5）％、（79±12）％、（91±17）％和（84±5）％。Smad7蛋白表达在对照组0．461±0.035与抗体组0．458±0．031之间差异无统计学意义，PDGF—BB组0．1Objective To assess if the modulating effect of platelet-derived growth factor （PDGF） - BB on p21^WAF1 was mediated by upregulating transforming growth factor （TGF）-β1 expression in vascular smooth muscle ceils （VSMC）. Methods TGF-β1 mRNA and protein expressions were measured by reverse transcription-PCR and ELISA, the protein expressions of p21^WAF1 and the downstream TGF-β signalling including TGF-β type Ⅰ receptor （ALK-5 in VSMC ） , Smurf2, pSmad2/3, Smad4, Smad7 were detected by Western blot. Results PDGF-BB significantly upregulated the expressions of TGF-β1 at mRNA （ 0. 79- fold） and protein （1.98-fold） levels in VSMC, significantly inhibited the expression of p21^WAF1（ -67 ±12） % , and enhanced the expressions of ALK-5, pSmad2/3, Smad4, Smurt＇2 protein by 1.21-fold, 0. 95- fold, 0. 69-fold and 2. 55-fold respectively, inhibited Smad7 expression （ - 65± 9 ） % , these alterations were partially restored by anti-TGF-β1 neutralizing antibody. Conclusion These findings suggested that PDGF-BB inhibited p21^WAF1 expression in VSMC partially through upregnlating TGF-β1 expression via PDGF- BB and TGF-β signalling pathways.

关 键 词：血管 肌细胞 平滑肌 血小板源性生长因子 转化生长因子Β1 周期素依赖激酶抑制剂p21 

分 类 号：R363[医药卫生—病理学]