重组人胰岛素pET28a-IHI下游工艺研究  

作　　者：杨亚男[1] 鲁勇[1] 刘景晶[1] 曹荣月[1] 

机构地区：[1]中国药科大学生命科学与技术学院微基因药学实验室,江苏南京210009

出　　处：《西北药学杂志》2010年第3期206-208,共3页Northwest Pharmaceutical Journal

基　　金：国家自然科学基金资助项目(No.30701023No.30872393);江苏省自然科学基金项目(No.BK2007170)

摘　　要：目的对含有重组人胰岛素原基因的大肠杆菌工程菌pET28a-I HI摇瓶发酵,并探讨采用磺酸化方法对包涵体蛋白纯化复性的工艺。方法工程菌pET28a-I HI经摇瓶发酵、机械破碎得到包涵体,包涵体经过磺酸化、等电点沉淀、DEAE-52柱层析三步纯化后采用15%SDS-PAGE电泳检测,经过复性,酶切,DEAE-52纯化后,冷冻干燥,样品进行HPLC检测以及整体生物学活性实验。结果工程菌表达量约在30%左右,经过三步纯化,包涵体纯度可达98%以上,酶切之后经质谱检测,与人胰岛素标准品相对分子质量一致,而且动物实验降血糖效果明显,1 L发酵液最终可得到人胰岛素140mg。结论该工艺耗时短,效果好,成本较低。

关 键 词：基因工程 重组人胰岛素 纯化 磺酸化 

分 类 号：Q78[生物学—分子生物学]