弓形虫表面抗原SAG1基因的克隆表达、纯化与鉴定  

作　　者：杨雯[1] 田春林[1] 朱穗京[1] 刘晓泉[1] 

机构地区：[1]广西医科大学寄生虫学教研室,南宁530021

出　　处：《广西医科大学学报》2010年第2期205-208,共4页Journal of Guangxi Medical University

基　　金：广西科学研究与技术开发计划项目(桂科合0443004-36)

摘　　要：目的:构建弓形虫SAG1基因原核表达质粒,诱导表达重组蛋白SAG1,分离纯化并检测其免疫反应性。方法:设计一对特异引物,体外扩增SAG1目的基因(双酶切纯化后)定向克隆至质粒pET29a(+)中,转化到大肠埃希菌(Escherichia coli)BL21,采用PCR、双酶切和测序等方法鉴定,并以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析重组蛋白的表达情况,经镍离子柱纯化重组蛋白后,用蛋白质印迹(Western blotting)分析与小鼠弓形虫阳性血清的免疫反应性。结果:重组质粒经PCR、双酶切反应和测序鉴定,产物的大小与结构均与预期值相符,经IPTG诱导后,稳定表达相对分子量(Mr)为28950的蛋白,纯化后的重组蛋白经Western blotting分析显示,与小鼠弓形虫感染血清有特异性反应条带。结论:成功构建重组表达质粒pET29a(+)-SAG1,使弓形虫表面抗原SAG1在体外获得表达,分离纯化的SAG1重组蛋白有免疫反应性。

关 键 词：弓形虫 SAG1基因 克隆表达 纯化 免疫反应性 

分 类 号：R382.5[医药卫生—医学寄生虫学]