hTRT基因荧光表达载体在真核细胞中的表达  

Expression of Recombinant hTRT Plasmid in Eukaryotic Cells

作　　者：周海文[1] 杨雯君[2] 刘德莉[3] 刘伟[3] 周曾同[1] 

机构地区：[1]上海交通大学医学院附属第九人民医院口腔医学院口腔黏膜科/上海市口腔医学研究所/上海市口腔医学重点实验室,200011 [2]上海交通大学医学院附属第九人民医院口腔医学院口腔颌面外科 [3]上海交通大学组织工程研究中心上海市组织工程重点实验室

出　　处：《医学研究杂志》2010年第5期21-23,124,共4页Journal of Medical Research

基　　金：国家自然科学基金(39970791);上海市教委资助项目(04BC45)

摘　　要：目的研究具绿色荧光蛋白报道系统的端粒酶基因真核质粒载体在真核细胞中的表达情况。方法用Lipo-fectAMINE 2000介导重组端粒酶pEGFP-hTRT质粒转染293细胞及人正常口腔黏膜细胞,经荧光显微镜、激光共聚焦显微镜观察荧光表达并进行流式细胞仪检测转染效率,采用RT-PCR检测转染细胞中外源性hTRT的表达。结果质粒在293细胞及人正常口腔黏膜细胞中正确表达,外源性端粒酶在细胞中表达。293细胞及人正常口腔黏膜角化细胞转染效率分别为34.74%和6.88%。结论 hTRT基因荧光表达载体在真核细胞中表达,便于观察转染情况,对研究组织工程种子细胞的衰老问题具有重要的意义。Objective To study the expression of human Telomerase Reverse Transeriptase （hTRT） in - vitro cell cultivation by transfecting plasmid pEGFP - hTRT into eukaryote for exploring. Methods The pEGFP - hTRT was transfeeted into 293 cells and normal human oral keratinocytes（OKC） by lipofectAMINE 2000. Transfection efficiency of the Green Fluorescent Protein （GFP） was detected under fluorescent microscope. Transfeetion efficiency was examined by flow cytometer. Exogenous hTRT was analyzed by RT - PCR. Results Transfeeed cells showed green fluorescent. Exogenous hTRT was reconstructed. The transfection efficiency of 293 cells and OKC was 34.74% 和l 6.88% respectively. Conclusion The pEGFP - hTRT has been successfully transfected into eukaryotic cells, which has an important role for extension life - span of normal human cells.

关 键 词：端粒酶 绿色荧光蛋白 基因转染 质粒 

分 类 号：R733.7[医药卫生—肿瘤]