pCS^(2+)-FLASH重组质粒的构建及斑马鱼FLASH基因反义mRNA探针的制备  

作　　者：丁可军[1,2] 何志旭[3] 舒莉萍[4] 许威[1] 姬牧远[1] 杨小燕[1] 

机构地区：[1]贵阳医学院儿科教研室,贵阳550004 [2]郎溪县人民医院儿科,安徽宣城242100 [3]贵阳医学院组织工程与干细胞中心,贵阳550004 [4]贵阳医学院免疫教研室,贵阳550004

出　　处：《第三军医大学学报》2010年第10期1119-1120,共2页Journal of Third Military Medical University

基　　金：国家自然科学基金面上项目(30960412);贵州省科技基础条件平台项目([2009]4005);贵州省优秀科技教育人才省长专项资金(S2008-4)

摘　　要：目的构建斑马鱼pCS2+-FLASH重组质粒,制备斑马鱼FLASH反义mRNA探针。方法提取斑马鱼胚胎总RNA后经RT-PCR克隆斑马鱼FLASH基因片段,将得到的FLASH片段和pCS2+质粒用BamHⅠ及HindⅢ双酶切后插入pCS2+质粒,通过对重组质粒进行双酶切及插入片段序列测序鉴定后,经T3RNA体外转录体系合成DIG-FLASH基因反义mRNA探针。结果RT-PCR法扩增出长度为533bp的特异性产物,构建的pCS2+-FLASH重组质粒经酶切鉴定和测序结果与预期相符;用FLASH反义mRNA探针进行斑马鱼全胚胎原位杂交,观察到FLASH在野生型斑马鱼神经系统中存在表达。结论成功构建了pCS2+-FLASH重组质粒及FLASH基因反义mRNA探针。

关 键 词：斑马鱼 pCS^2+ FLASH 反义mRNA 

分 类 号：R394-33[医药卫生—医学遗传学]