应用实时BIA研究酵母PHO4和PHO2的相互作用  

作　　者：夏赞贤[1] 敖世洲[1] 

机构地区：[1]中国科学院上海生物化学研究所分子生物学国家重点实验室

出　　处：《生物化学与生物物理学报》1999年第2期145-149,共5页

基　　金：国家自然科学基金

摘　　要：应用实时生物分子相互作用分析技术（ＢＩＡ）分析了酵母ＰＨＯ４和ＰＨＯ２蛋白的相互作用。将ＰＨＯ４蛋白通过氨基耦联在感应片上。进样５μｍｏｌ／Ｌ重组的谷胱甘肽转移酶融合的ＰＨＯ２蛋白（ＧＳＴＰＨＯ２）及其两种突变体融合蛋白。结果表明ＰＨＯ２的２３０位丝氨酸变为天冬氨酸的突变体（ＧＳＴ２ＳＤ）与ＰＨＯ４有强的表面等离子体激元共振（ｓｕｒｆａｃｅｐｌａｓｍｏｎｒｅｓｏｎａｎｃｅ，ＳＰＲ）信号，而野生型ＰＨＯ２和２３０位丝氨酸变为丙氨酸的突变体（ＧＳＴ２ＳＡ）与ＰＨＯ４没有作用，从而在体外证实了ＰＨＯ４和ＰＨＯ２之间的相互作用，并且ＰＨＯ２蛋白的２３０位丝氨酸的磷酸化状态为这种相互作用所必需。ＧＳＴ２ＳＤ以０．５、０．７５、１．０、１．５、２．０μｍｏｌ／Ｌ浓度梯度进样，分析了ＰＨＯ４和ＧＳＴ２ＳＤ蛋白的相互作用的动力学，它们的结合速率常数ｋａ是２．４×１０４（ｍｏｌ／Ｌ）－１ｓ－１，解离速率常数ｋｄ为３．５×１０－５ｓ－１，结合常数Ｋａ为６．９×１０８（ｍｏｌ／Ｌ）－１。

关 键 词：PHO4 PHO2 酵母 BIA 

分 类 号：Q949.326.1[生物学—植物学]