自杀基因ePNP的克隆及在人肝癌细胞HepG_2的表达  

作　　者：戴晓宇[1,2] 李克强[1,2] 乐东海[1,2] 毛联钢[1,2] 冯伟云[1,2] 

机构地区：[1]宁波市第二医院,浙江宁波315010 [2]宁波市肿瘤分子生物学重点实验室,浙江宁波315010

出　　处：《现代实用医学》2010年第6期659-660,F0003,共3页Modern Practical Medicine

基　　金：浙江省自然科学基金;编号:Y206897

摘　　要：目的构建含大肠杆菌的嘌呤核苷酸磷酸化酶(ePNP)DNA的重组逆转录病毒载体,观察ePNP基因在人肝癌细胞株HepG2的表达。方法用PCR法获得ePNP亚克隆,构建重组逆转录病毒载体pDsRed-ePNP,鉴定测序。脂质体法将逆转录病毒载体pDsRed-ePNP转染AmphoPackTM-293包装细胞,获得高滴度病毒并感染HepG2细胞。流式细胞术和荧光显微镜检测红色荧光蛋白(RFP)的表达。RT-PCR法检测ePNPmRNA的表达。ATP-生物荧光体外检测实验(ATP-TCA法)检测不同浓度Fludarabine对HepG2、HepG2/pDsRed和HepG2/ePNP细胞的杀伤作用。结果克隆的ePNP基因与文献报道一致,成功构建重组逆转录病毒载体pDsRed-ePNP。病毒包装后滴度为5E+4TU/mL。表达RFP的HepG2/ePNP阳性细胞率为97.1%。HepG2/ePNP细胞稳定表达ePNP。低浓度Fludarabine对HepG2/ePNP细胞毒效应明显。结论成功构建重组逆转录病毒载体pDsRed-ePNP,并且获得稳定表达ePNP基因的HepG2/ePNP人肝癌细胞株。

关 键 词：肝肿瘤 人肝癌细胞株HEPG2 自杀基因 逆转录病毒载体 

分 类 号：R34[医药卫生—基础医学] R575