由Survivin启动子驱动的人4-1BBL基因的腺病毒载体的构建  

Construct an adeno virus vector which has an aiming gene 4-1BBL drived by Survivin promotor

作　　者：马士崟[1,2] 王飞[2] 李慧[2] 徐淑秀[2] 吴浩荣[1] 

机构地区：[1]苏州大学第二附属医院普外科,215000 [2]安徽省蚌埠医学院第一附属医院耳鼻咽喉头颈外科

出　　处：《中华实验外科杂志》2010年第9期1335-1337,共3页Chinese Journal of Experimental Surgery

基　　金：安徽省教育厅重点课题（kj2010a238）

摘　　要：目的 构建并鉴定由具有肿瘤特异性启动作用的生存素启动子（Survivin Promotor）驱动4-1BBL（CD137 Ligand）基因的腺病毒载体.方法 用聚合酶链反应（PCR）和逆转录（RT）-PCR的方法,分别从人肺癌细胞株A549中克隆Survivin启动子和共刺激分子4-1BBL基因,通过T载体和转移载体将目的基因亚克隆到腺病毒载体上,293A细胞包装成病毒颗粒rAD-Survivin promotor-4-1BBL,4-1BBL流式抗体检测基因在人喉癌细胞株HEp-2及人乳腺细胞株Hs 578Bst上的表达.结果 通过PCR检测、直接测序证实目的基因克隆成功并亚克隆到表达载体上,免疫细胞化学方法证实病毒包装成功,流式检测发现重组腺病毒载体rAD-Survivin promotor-4-1BBL能够特异性地在肿瘤细胞HEp-2上高表达4-1 BBL.结论 由Survivin-promotor驱动4-1BBL基因的具有肿瘤特异性腺病毒载体构建成功.Objective To construct an adeno virus vector inserted aiming gene 4-1 BBL （CD137 ligand） drived by Survivin promotor. Methods Clone aiming gene Survivin promotor and 4-1 BBL by polymerase chain reaction （ PCR） or reverse transcription （ RT） -PCR from Human lung cancer cell strain A549 respectively, and subclone the two gene into an adeno virus expression vector. Results The aiming genes is verificated succeed clone and connected into expression vector by PCR, direct sequencing, immunocytochemistry verificated the virus is succeed packaged,FCM conforming that 4-1 BBL was specific expressed on HEp-2 cell. Conclusion The tumor specific adeno virus vector which has an aiming gene 4-1 BBL drived by Survivin promotor is constructed.

关 键 词：Survivin-promotor 4-1BBL 腺病毒载体 基因治疗 

分 类 号：R73[医药卫生—肿瘤]