芸薹属查尔酮合酶基因家族RNA干扰载体的构建  

Construction of RNA Interference Vector of Chalcone Synthase Gene Family in Brassica

作　　者：闫楠[1] 刘琼[1] 马丽娟[1] 柴友荣[1] 

机构地区：[1]西南大学农学与生物科技学院农业部生物技术与作物品质改良重点实验室重庆市作物品质改良重点实验室重庆市油菜工程技术研究中心,重庆北碚400716

出　　处：《贵州农业科学》2010年第9期1-4,共4页Guizhou Agricultural Sciences

基　　金：国家"863"计划课题"甘蓝型油菜类黄酮途径功能基因克隆及黄籽性状代谢工程研究"(2006AA10Z110和2008AA10Z152);重庆市科技攻关项目"油菜分子育种及品质检测技术研究"(CSTC2009AB1030)

摘　　要：采用PCR法克隆芸薹属CHS基因家族的RNAi片段,经T-载体克隆并测序后,用特定的双酶切方案将其反义片段、正义片段分别亚克隆到平台载体pFGC5941M的启动子与间隔区、间隔区与终止子之间,形成RNAi载体,转化大肠杆菌,完成复合PCR鉴定,然后转化根癌农杆菌。结果表明:经测序,以甘蓝型油菜BnCHS1基因为模板克隆的芸薹属CHS基因家族的RNAi片段BCHSI为831 bp,采用Nco+Aat和BamH+Xba分别将其反义和正义片段亚克隆到pFGC5941M中;经复合PCR鉴定,11 814 bp的RNAi载体pFGC 5941M-BCHSI(简称pBCHSI)构建成功,并获得了根癌农杆菌LBA4404的工程菌株。芸薹属CHS基因家族RNAi载体的成功构建,将促进甘蓝型油菜、白菜、甘蓝等芸薹属物种类黄酮性状的研究与修饰。The 831-bp RNA interference （RNAi） fragment of Chalcone synthase （CHS） gene family in Brassica was cloned by PCR and then the antisense and sense fragments were inserted into the promoter spacer and spacer-terminator of RNAi basic vector pFGC5941M using NcoI4-AatII and BarnHI＋XbaI double digestions respectively. The compound PCR identification showed that the 11814-bp RNAi vector was pFGC5941M-CHSI （pBCHSI） and LBA4404 Agrobacterium tumefaciens strain was obtained successfully, which can promote research and modification of flavonoid trait in Brassica.

关 键 词：芸薹属 类黄酮 查尔酮合酶(CHS) RNA干扰(RNAI) 载体构建 

分 类 号：S565.9[农业科学—作物学]